PCR法を用いた感染根管内におけるMTAD溶液の抗菌効果の解析

[Analysis of antimicrobial effect of MTAD solution in infected root canal system using PCR technique].

抄録

はじめに:

臨床的に許容される消毒薬は、有機石灰・ミネラル石灰の特性と抗菌効果を有し、無毒でなければならない。

INTRODUCTION: Clinically acceptable antiseptic should possess organolithic-mineralolithic properties and antimicrobial efficacy, and should be non-toxic.

目的:

本論文の目的は、臨床的に原発性歯根尖性歯周炎と診断された患者において、ドキシサイクリン、クエン酸、洗剤Tween-80（MTAD）の溶液で洗浄する前後の感染歯根管における最も一般的な微生物（Porphyromonas gingivalis、Agregatibacter actinomycetemcomitans、Tanerella forsythensis、Prevotella intermedia、Treponema denticola、Enterococcus faecalis）のゲノムの存在を評価することである。

OBJECTIVE: The aim of the paper was to assess the presence of genomes of the most common microorganisms (Porphyromonas gingivalis, Agregatibacter actinomycetemcomitans, Tanerella forsythensis, Prevotella intermedia, Treponema denticola and Enterococcus faecalis) in infected tooth root canals before and after rinsing with solution of doxycycline, citric acid and detergent Tween-80 (MTAD) in patients with clinically diagnosed primary apex periodontitis.

方法:

MTAD溶液を使用する前と後の主に感染した管腔の内容物を、微生物DNAの存在を証明する生物学的材料として使用した。細菌ゲノムの検出には、マルチプレックスPCR法を適用した。

METHODS: The content of primarily infected canals before and after using the MTAD solution was used as a biological material in which the presence of microorganisms DNA was proved. For the detection of bacterial genome the multiplex PCR technique was applied.

結果:

根管治療前の陽性サンプルの割合は 100％であった。感染根管ではE. faecalisが最も優勢であった（37％）。比較的高い割合で、P. intermedia（25％）、A. actinomycetemcomitans（20％）、T. denticola（17％）、T. forsythensis（15％）、P. gingivalis（10％）が検出された。MTAD溶液を使用して管システムをすすいだ後、E. faecalis（12％）、P. intermedia（0％）、T. forsythensis（0％）、P. gingivalis（0％）が統計的に有意に減少した。その他の細菌も減少したが、統計的に有意ではなかった。

RESULTS: The percentage of positive samples before canal treatment was 100%. In infected root canals E. faecalis was most dominant (37%). In a relatively high percentage we detected P. intermedia (25%), A. actinomycetemcomitans (20%), T. denticola (17%), T. forsythensis (15%) and P. gingivalis (10%). After rinsing the canal system using MTAD solution, there was a statistically significant decrease in E. faecalis (12%), P. intermedia (0%), T forsythensis (0%) and P. gingivalis (0%). The presence of other bacteria was also diminished but not statistically significantly.

結論:

数対のプライマーを用いてさまざまなゲノム配列を同時に増幅できるマルチプレックスPCR法を適用した結果、感染根管で最も優勢であったのはE. faecalisであった。P. intermedia、A. actinomycetemcomitans、T. denticola、T. forsythensisおよびP. gingivalisであった。MTAD溶液による根管の機械的処理および灌流後では、P. intermedia、P. gingivalisおよびT. forsythensisは検出されなかった。E. faecalis、A. actinomycetemcomitansおよびT. denticolaの存在は減少したが、統計学的に有意ではなかった。

CONCLUSION: With the application of multiplex PCR technique which provided a simultaneous amplification of various genomic sequences, using several pairs of primers, the most dominant in infected root canals were E. faecalis. P. intermedia, A. actinomycetemcomitans, T. denticola, T. forsythensis and P. gingivalis. After mechanic treatment and irrigation of root canals with MTAD solution, P. intermedia, P. gingivalis and T forsythensis were not found. The presence of E. faecalis, A. actinomycetemcomitans and T. denticola was diminished, however, not statistically significantly.