慢性骨髄性白血病（CML）患者由来の樹状細胞に自己由来のトータルRNAを導入すると、CMLに特異的な細胞毒性が誘導される

Chronic Myelocytic Leukemia (CML) Patient-Derived Dendritic Cells Transfected with Autologous Total RNA Induces CML-Specific Cytotoxicity.

• Li Yu
• Ting Hu
• Tian Zou
• Qingzhi Shi
• Guoan Chen

抄録

発がん性bcr/abl1融合遺伝子は、正常組織には存在しない慢性骨髄性白血病（CML）特異的な抗原である。このことから、bcr/abl1 は、正常組織を温存しつつ、最小限の残存疾患に対して特異的な免疫応答を引き出す CML ワクチンの開発に最適なターゲットとなっている。本研究の目的は、CML患者由来の樹状細胞（DC）をさまざまな方法で誘導し、免疫療法のためにCML特異的な腫瘍細胞毒性を解析することである。10人のCML患者由来の骨髄由来単核細胞を、組換えヒトインターロイキン-4、rh-顆粒球-マクロファージ-コロニー刺激因子、腫瘍壊死因子-αのいずれかの存在下で、トータルRNA-リポフェクタミン複合体、トータルRNA、またはCML腫瘍溶解液（凍結融解）のいずれかを用いて、CML-DCの分化を誘導する方法を検討した。ＣＭＬ-ＤＣの成熟は、ＣＤ１α、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６の発現、およびリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応によって確認され、これらのＤＣ細胞のＣＭＬ由来であることが検証された。CML-DCは細胞傷害性T細胞（CTL）のアポトーシスを刺激し、IL-12を高レベルで分泌し、ヌードマウスのK562腫瘍化を有意に抑制する効果を有していた。また、リポフェクタミントランスフェクションによりtotal RNAをパルス化したCML-DCは、腫瘍特異的CTL機能に最も強い効果を示した。これらの結果は、リポフェクタミンによるトータルRNAをトランスフェクションしたCML-DCが最も強力なCTL細胞毒性を誘導し、CML免疫療法の最大の可能性を持っていることを示している。この研究は、抗白血病反応を誘導するための DC ベースの戦略に期待が持て、CML に対する RNA ワクチン接種の開発の基礎を確立するものである。

The oncogenic bcr/abl1 fusion gene is a chronic myelogenous leukemia (CML)-specific antigen which is absent in normal tissues. This makes bcr/abl1 a perfect target for developing CML vaccines that elicit specific immune responses against minimal residual disease while sparing normal tissue. The aim of this study was to use different methods to induce dendritic cells (DCs) derived from patients with CML (CML-DCs) and analyze them for CML-specific tumor cytotoxicity for immune therapy. Bone marrow-derived mononuclear cells from ten CML patients were studied to induce CML-DC differentiation in the presence of recombinant human interleukin-4, rh-granulocyte-macrophage-colony stimulating factor, and tumor necrosis factor-alpha with either a total RNA-lipofectamine complex, total RNA or CML tumor lysate (freeze-thawed). CML-DC maturation, confirmed by expression of CD1α, CD40, CD80, CD83, CD86 and by real-time polymerase chain reaction, validated the CML-origin of these DC cells. CML-DCs stimulated cytotoxic T-cell (CTL) apoptosis, high levels of IL-12 secretion, and had significant inhibitory effect on K562 tumorigenicity in nude mice. CML-DCs pulsed with total RNA by lipofectamine transfection produced the strongest effect in tumor-specific CTL functions. These results indicate that CML-DCs transfected with total RNA by lipofectamine induce the strongest CTL cytotoxicity and have the greatest potential for CML immune therapy. This study holds promise for a DC-based strategy for inducing anti-leukemia responses and establishes a foundation for developing RNA vaccination against CML.