種間体細胞核移植により初めてクローン化されたバクトリアンラクダ（Camelus bactrianus）の子牛。絶滅の危機に瀕している野生のバクトリアンラクダの保護に向けた一歩

First cloned Bactrian camel (Camelus bactrianus) calf produced by interspecies somatic cell nuclear transfer: A step towards preserving the critically endangered wild Bactrian camels.

• Nisar Ahmad Wani
• Binoy S Vettical
• Seung B Hong

抄録

ドロメダリーラクダ（Camelus dromedarius）の卵母細胞をレシピエント細胞として用いて、バクトリアンラクダ（Camelus bactrianus）成体とラマ（Llama glama）の皮膚線維芽細胞をドナー核とした種間体細胞核移植（iSCNT）胚を作製する可能性を検討した。また、バクトリアン細胞を用いて再構築した胚を、シンクロナイズドロメダリーラクダのレシピエントの子宮に移植し、代理母としての利用の可能性を探った。血清飢餓皮膚線維芽細胞は、スーパー刺激されたドロメダリーラクダから収集した核酸化成熟卵母細胞の周囲の空間に注入され、エッペンドルフエレクトロポレーターを使用して融合された。5μMイオノマイシンおよび6-ジメチルアミノプリンで活性化した後、5％CO2、5％O2、および90％N2の空気中で38.5℃で培養した。実験1では、7日目の胚盤胞をHoechstで染色して細胞数を数え、実験2では、同期化されたドロメダリー受信者に移した。胚盤胞のより低い数（P < 0.05）は、ドロメダリーとバクトリアン線維芽細胞で再構築したものと比較して、ラマからの線維芽細胞を利用した再構築物から得られた。しかし、その細胞数に差は認められなかった。実験2では、胚盤胞の高い（P < 0.05）割合は、ドロメダリー細胞で再構築されたものと比較して、バクトリア線維芽細胞で再構築された切断胚から得られた。バクトリア細胞で再構築された26の7日目の胚盤胞は、30日目に確立された5つの妊娠を持つ23の同期ドメダリー受信者に転送されたが、妊娠の1つだけが学期に開発し、33キログラムの重量を量る健康な子牛は、妊娠の392日目を完了した後に生まれました。残念ながら子牛は7日目に急性敗血症で死亡しました。以上のように、本研究では、卵母細胞の供給源として、また妊娠を成育させるためのサロゲートとしてドロメダリーラクダを使用し、iSCNTを用いてクローン化されたバクトリアンの子牛を初めて出産したことを報告しました。

Studies were conducted to explore the possibility of employing dromedary camel (Camelus dromedarius) oocytes as recipient cytoplasts for the development of interspecies somatic cell nuclear transfer (iSCNT) embryos using skin fibroblast cells of an adult Bactrian camel (Camelus bactrianus) and Llama (Llama glama) as donor nuclei. Also, the embryos reconstructed with Bactrian cells were transferred into the uterus of synchronized dromedary camel recipients to explore the possibility of using them as surrogate mothers. Serum-starved skin fibroblast cells were injected into the perivitelline space of enucleated mature oocytes, collected from super-stimulated dromedary camels, and fused using an Eppendorf electroporator. After activation with 5μM ionomycin and 6-dimethylaminopurine, they were cultured at 38.5°C in an atmosphere of 5% CO2, 5% O2, and 90% N2 in air. In experiment 1, Day 7 blastocysts were stained with Hoechst to count their cell numbers, while in experiment 2, they were transferred to synchronized dromedary recipients. A lower number (P < 0.05) of blastocysts were obtained from reconstructs utilizing fibroblast cells from Llama when compared with those reconstructed with dromedary and Bactrian fibroblast cells. However, no difference was observed in their cell numbers. In experiment 2, a higher (P < 0.05) proportion of blastocysts were obtained from the cleaved embryos reconstructed with Bactrian fibroblast cells when compared to those reconstructed with dromedary cells. Twenty-six Day 7 blastocysts reconstructed with Bactrian cells were transferred to 23 synchronized dromedary recipients with 5 pregnancies established on Day 30, however, only one of the pregnancies developed to term and a healthy calf weighing 33 kgs was born after completing 392 days of gestation. Unfortunately, the calf died on day 7 due to acute septicemia. In conclusion, the present study reports, for the first time, birth of a cloned Bactrian calf by iSCNT using dromedary camel as a source for oocytes as well as a surrogate for carrying the pregnancy to term.