マウス肥満細胞株からのロイコトリエンBを測定することで、食品成分の抗アレルギー効果を評価する新しい方法

A new method to evaluate anti-allergic effect of food component by measuring leukotriene B from a mouse mast cell line.

抄録

肥満細胞から産生されるケミカルメディエーターであるロイコトリエン（LT）は、食物アレルギーや花粉症などのアレルギー症状に重要な役割を果たしています。私たちは、肥満細胞株PB-3cを用いて、化学物質の抗LTB活性の評価法の構築を試みました。アラキドン酸（AA）を添加、または添加せずに前培養したPB-3cを、カルシウムイオノフォア（A23187）で20分間刺激し、細胞内のLTB産生量をUV検出付きHPLCで測定した。PB-3cをAAなしで前培養した場合、LTBは検出されなかった。一方、AAで前培養したPB-3cのLTB産生量はHPLCで検出可能であり、LTB検出のためのPB-3cの最適条件は、50μMのAAで48時間前培養した細胞を利用することであった。MK-886（5-リポキシゲナーゼ阻害剤）はLTBの産生を完全に阻害したが、AACOCF（ホスホリパーゼA阻害剤）はLTBの産生をわずかに増加させたことから、LTBは外因性の遊離AAから5-リポキシゲナーゼ経路を経て生成されると考えられた。この手法を、食品成分の抗LTB活性の評価に応用しました。50μMのAAで48時間前培養したPB-3cを、50μMの大豆イソフラボン（ダイジン、ゲニスチン、ダイゼイン、ゲニステイン）、エクオール、ケルセチン、ケンフェロールの存在下でA23187で刺激した。ゲニステイン、エクオール、ケルセチン、カエンフェロールは、細胞毒性を伴わずにLTBの産生を強く阻害した。これらの結果は、PB-3cを用いた新しいアッセイシステムが、食品成分によるLTB阻害活性を評価するのに便利であることを示唆している。この方法は、フラボノイドなどの食品成分によるLTB放出抑制のメカニズムや構造活性相関の解明に活用できると考えられる。

Leukotrienes (LTs), chemical mediators produced by mast cells, play an important role in allergic symptoms such as food allergies and hay fever. We tried to construct an evaluation method for the anti-LTB activity of chemical substances using a mast cell line, PB-3c. PB-3c pre-cultured with or without arachidonic acid (AA) was stimulated by calcium ionophore (A23187) for 20 min, and LTB production by the cells was determined by HPLC with UV detection. LTB was not detected when PB-3c was pre-cultured without AA. On the other hand, LTB production by PB-3c pre-cultured with AA was detectable by HPLC, and the optimal conditions of PB-3c for LTB detection were to utilize the cells pre-cultured with 50 µM AA for 48 h. MK-886 (5-lipoxygenase inhibitor) completely inhibited LTB production, but AACOCF (phospholipase A inhibitor) slightly increased LTB production, suggesting that LTB was generated from exogenous free AA through 5-lipoxygenase pathway. We applied this technique to the evaluation of the anti-LTB activity of food components. PB-3c pre-cultured with 50 µM AA for 48 h was stimulated with A23187 in the presence of 50 µM soybean isoflavones (daidzin, genistin, daidzein, and genistein), equol, quercetin, or kaempferol. Genistein, equol, quercetin, and kaempferol strongly inhibited LTB production without cytotoxicity. These results suggest that a new assay system using PB-3c is convenient to evaluate LTB inhibition activity by food components. This method could be utilized for elucidation of the mechanisms of LTB release suppression by food components such as flavonoids and the structure-activity relationship.