レスベラトロールは、肥大化したH9c2心筋芽細胞におけるサーチュイン1の活性化を介してインターロイキン-6の発現を抑制する

Resveratrol suppresses interleukin-6 expression through activation of sirtuin 1 in hypertrophied H9c2 cardiomyoblasts.

• Fariba Akhondzadeh
• Akram Astani
• Razieh Najjari
• Morteza Samadi
• Mohammad Ebrahim Rezvani
• Fatemeh Zare
• Ali Mohammad Ranjbar
• Fatemeh Safari

抄録

炎症性サイトカインであるインターロイキン-6（IL-6）は、心肥大の発症に重要な役割を果たしている。最近の研究では、レスベラトロールが心筋保護効果を示すことが報告されている。本研究では、レスベラトロールがヒストン脱アセチル化酵素サーチュイン1（SIRT1）を介して肥大化したH9c2心筋芽細胞のIL-6を抑制するかどうかを検討した。肥大を誘導するために、細胞をアンジオテンシンII（Ang II）でインキュベートした。処置群は、レスベラトロール（Ｒ）の異なる用量（１、１０、２５、５０、７５および１００μＭ）で処置した。細胞生存率は、３-（４，５-ジメチルチアゾール-２-イル）-２，５-ジフェニルテトラゾリウムブロマイドアッセイを用いて測定した。細胞サイズは、クリスタルバイオレット染色を用いて決定した。遺伝子発現はリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応法により評価した。IL-6濃度の測定には、酵素結合免疫吸着法を用いた。その結果、Ｒ２５＋Ａｎｇ群、Ｒ５０＋Ａｎｇ群、Ｒ１００＋Ａｎｇ群では、Ａｎｇ群と比較して、細胞面積およびＡｎｐメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）レベルが有意に減少した。そこで、レスベラトロールの抗炎症作用を評価するために、10、20、30、40、50μMのレスベラトロールを用いた。その結果、Ang IIはIL-6をmRNAとタンパク質の両方で上昇させ（p<.001 vs. 正常）、レスベラトロール（50μM）はAng群と比較してIL-6のmRNA（p<.01）とタンパク質（p<.05）を有意に減少させることが明らかになった。しかし、SIRT1阻害剤であるEX-527を前処理した群では、レスベラトロールの反応は部分的に逆転した。また、IL-6受容体成分（gp130およびgp80）の転写レベルは、実験群間で有意な変化は認められなかった。今回のデータは、レスベラトロールがSIRT1活性化を介してIL-6を抑制することで、H9c2細胞をAng II誘導肥大から保護することを示唆している。

Inflammatory cytokine, interleukin-6 (IL-6), plays an important role in the pathogenesis of cardiac hypertrophy. Recent studies have documented that resveratrol exhibits cardioprotective effects. The present study attempts to explore whether resveratrol suppreses IL-6 in hypertrophied H9c2 cardiomyoblasts through histone deacetylase, sirtuin 1 (SIRT1). To induce hypertrophy, the cells were incubated with angiotensin II (Ang II). Treatment groups were treated with different doses (1, 10, 25, 50, 75, and 100 μM) of resveratrol (R). Cell viability was measured using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Cell size was determined using crystal violet staining. Gene expression was assessed by real-time polymerase chain reaction technique. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure IL-6 concentration. The results showed that cell area and ANP messenger RNA (mRNA) levels decreased significantly in R25+Ang, R50+Ang, and R100+Ang groups, as compared with Ang group. Therefore, 10, 20, 30, 40, and 50 μM of resveratrol were used to to evaluate its anti-inflammatory effects. The results revealed that Ang II upregulated IL-6 at both mRNA and protein levels (p < .001 vs. normal) and resveratrol (50 μM) decreased IL-6 mRNA (p < .01) and protein (p < .05) significantly in comparison to Ang group. However, in groups in which the cells were pretreated with SIRT1 inhibitor, EX-527, the response of resveratrol was partially reversed. Transcription levels of IL-6 receptor components (gp130 and gp80) did not change significantly among the experimental groups. The current data suggests that resveratrol protects H9c2 cells against Ang II-induced hypertrophy by suppression of IL-6 through SIRT1 activation.

© 2020 Wiley Periodicals, Inc.