ガスクロマトグラフィー-タンデム質量分析法によるタンパク質付加物の遊離イオウマスタードへの変換によるヒトのイオウマスタード暴露の検証

Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Verification of Sulfur Mustard Exposure in Humans through the Conversion of Protein Adducts to Free Sulfur Mustard.

• Sheena A Young
• Benedict R Capacio

抄録

硫黄マスタード（HD; bis(2-chloroethyll) sulfide）への暴露は、血漿タンパク質の遊離アスパラギン酸およびグルタミン酸残基との付加体の形成をもたらすことがよく知られている（Lawrence, R. J., Smith, J. R., and Capacio, B. R. 2008 32, (1), 31-36）。HD曝露の検証のために以前に報告された分析方法の修正版が開発されました(Lawrence, R. J., Smith, J. R., and Capacio, B. R. 2008 32, (1), 31-36)。本明細書で報告されている方法は、塩酸とHD誘導血漿タンパク質との反応を含み、その結果、アダクトの同時開裂および遊離HDへの変換をもたらす。水捕捉剤である２，２-ジメトキシプロパンを反応収率を高めるために混合物に添加した。重水素化(d)チオジグリコールを内部標準物質として添加し、重水素化硫黄マスタードへの変換を行った。分析対象物をヘキサン液液-液抽出により分離し、その後、ガスクロマトグラフィータンデム質量分析法（GC-MS-MS）により分析した。日間および日内試験を実施し、本法の精度と精度を評価した。品質管理（QC）標準を用いた個別の検量線を 5 日間に作成し、5 セットの QC を用いた検量線を 1 日間に作成した。すべての結果は、バリデーション基準の許容範囲内であった。直線性、検出限界、定量限界も各検量線について検証した。この高感度（検出限界pg/mL）の方法は、硫黄マスタード暴露の決定的なマーカーの迅速な分析に使用することができます。

Exposures to sulfur mustard (HD; bis(2-chloroethyll) sulfide) are well-known to result in the formation of adducts with free aspartate and glutamate residues of plasma proteins (Lawrence, R. J., Smith, J. R., and Capacio, B. R. 2008 32, (1), 31-36). A modified version of the analytical method reported previously for the verification of HD exposure has been developed (Lawrence, R. J., Smith, J. R., and Capacio, B. R. 2008 32, (1), 31-36). The method reported herein involves the reaction of hydrochloric acid with HD-adducted plasma proteins, resulting in the simultaneous cleavage and conversion of the adduct to free HD. A water scavenger, 2,2-dimethoxypropane, was added to the mixture to increase the reaction yield. Deuterated (d) thiodiglycol was added as an internal standard and underwent conversion to deuterated sulfur mustard. The analytes were isolated by hexane liquid-liquid extraction and subsequently analyzed by gas chromatography tandem mass spectrometry (GC-MS-MS). An interday and intraday study was performed to evaluate the accuracy and precision of the method. Individual calibration curves with quality control (QC) standards were prepared on 5 days, and a calibration curve with five sets of QCs was prepared on a single day. All results were within the acceptable limits of the validation criteria. Linearity, limit of detection, and limit of quantitation were also verified for each calibration curve. This highly sensitive (pg/mL limit of detection) method can be used for rapid analysis of a definitive marker of sulfur mustard exposure.