スピニングディスク-遠隔集束顕微鏡

Spinning disk-remote focusing microscopy.

• Michele Gintoli
• Sharika Mohanan
• Patrick Salter
• Elizabeth Williams
• James D Beard
• Gaspar Jekely
• Alexander D Corbett

抄録

細胞分解能で生きたサンプルの画像を迅速に取得するために、遠隔集光と差動スピニングディスク光学分割を組み合わせることで、高速共焦点イメージングを達成しました。軸方向の全幅半値最大値が5μm以下、横方向の全幅半値最大値が490nmと、それぞれ5μm以下で、軸方向130μmの範囲で256×128μmの視野を持つことが実証されました。画像のボリューム歪みを最小限に抑えるアライメントを達成するために、水のインデックスキャリブレーションスライドが使用されました。生きた生物学的サンプルへの応用は、1ボリューム/秒で24 µmの軸方向範囲の画像ボリュームを取得することで実証され、幼虫のカルシウムベースの神経細胞活動の検出を可能にしました。

Fast confocal imaging was achieved by combining remote focusing with differential spinning disk optical sectioning to rapidly acquire images of live samples at cellular resolution. Axial and lateral full width half maxima less than 5 µm and 490 nm respectively are demonstrated over 130 µm axial range with a 256 × 128 µm field of view. A water-index calibration slide was used to achieve an alignment that minimises image volume distortion. Application to live biological samples was demonstrated by acquiring image volumes over a 24 µm axial range at 1 volume/s, allowing for the detection of calcium-based neuronal activity in larvae.

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