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ミコフェノール酸と6-メルカプトプリンは、肉芽腫症と多発性血管炎患者のB細胞増殖を抑制したが、ミコフェノール酸のみがB細胞IL-6産生を抑制した
Mycophenolic acid and 6-mercaptopurine both inhibit B-cell proliferation in granulomatosis with polyangiitis patients, whereas only mycophenolic acid inhibits B-cell IL-6 production.
PMID: 32645052 DOI: 10.1371/journal.pone.0235743.
抄録
多管性肉芽腫症（GPA）は、主に小血管を侵す自己免疫疾患である。B細胞は自己抗体産生細胞の前駆体としてGPAの発症に重要な役割を果たしていますが、（自己）抗体の産生には非依存的に寄与している可能性があります。このことは、（リツキシマブを用いた）B細胞除去療法が、疾患の寛解を誘導し維持する上で有効であることによっても強調されています。マイコフェノレート-モフェチル（MMF）とアザチオプリン（AZA）はGPA患者によく用いられる免疫抑制療法である。興味深いことに、MMFを投与されたGPA患者はAZAを投与された患者に比べて再発しやすいが、これらの薬剤のB細胞への影響についてはほとんど知られていない。我々は、MMFまたはAZA治療（またはそれらの活性化合物）が循環B細胞サブセット分布を変化させ、GPA患者におけるin vitroでのB細胞増殖およびサイトカイン産生に異なる影響を及ぼし、それが再発率の違いの原因となっているかどうかを調べた。AZA治療を受けた患者（n = 13）、MMF治療を受けた患者（n = 12）、未治療のGPA患者（n = 19）、およびマッチしたHC（n = 41）のサンプルを用いて、循環B細胞サブセット頻度を測定した。MMFおよびAZAの活性化合物、MPAおよび6-MPのそれぞれのB細胞増殖およびサイトカイン産生に対するex vivo効果を決定するために、未処置GPA患者（n = 29）およびマッチドHC（n = 30）のPBMCを、MPAまたは6-MPを用いたCpG-オリゴデオキシヌクレオチド（CpG）の存在下で3日間培養した。再刺激後（酢酸フォルボルミリスチン酸カルシウムイオノフォアで）、サイトカイン陽性Ｂ細胞頻度を測定した。最後に、インビトロでのＢ細胞増殖およびサイトカイン産生に対するＭＭＦまたはＡＺＡ処置の効果を評価するために、ＭＭＦ処置された患者（ｎ＝１８）およびＡＺＡ処置された患者（ｎ＝２８）のＰＢＭＣおよびＨＣ（ｎ＝４１）をＣｐＧで培養した。記憶B細胞頻度は、MMF治療患者と比較してAZA-治療患者で増加したが、他のサブセットに違いはなかった。MMFおよびAZAの活性化合物は、MPAがGPA患者およびHCのB細胞増殖を減少させることをin vitroで示した。MMFおよびAZAで処理された患者のB細胞増殖に違いはなかった。最後に、IL-6+のB細胞頻度は6-MPと比較してMPAで減少した。また、MMF投与群とAZA投与群では、IL-10+、IL-6+、TNFα+のB細胞の割合や増殖に差は認められなかった。これらの結果から、GPA患者のB細胞のサイトカイン産生を抑制する点では、MMFの方がAZAよりも優れている可能性が示唆された。今後の研究では、これらの免疫抑制剤が他の免疫細胞に及ぼす影響を評価し、再発率の違いの原因となるメカニズムを明らかにすべきである。
Granulomatosis with polyangiitis (GPA) is an autoimmune disease affecting mainly small blood vessels. B-cells are important in the GPA pathogenesis as precursors of autoantibody-producing cells but likely also contribute (auto)antibody-independently. This has been underlined by the effectiveness of B-cell-depletion (with Rituximab) in inducing and maintaining disease remission. Mycophenolate-mofetil (MMF) and azathioprine (AZA) are immunosuppressive therapies frequently used in GPA-patients. Interestingly, MMF-treated GPA-patients are more prone to relapses than AZA-treated patients, while little is known about the influence of these drugs on B-cells. We investigated whether MMF or AZA treatment (or their active compounds) alters the circulating B-cell subset distribution and has differential effects on in vitro B-cell proliferation and cytokine production in GPA-patients that might underlie the different relapse rate. Circulating B-cell subset frequencies were determined in samples from AZA-treated (n = 13), MMF-treated (n = 12), untreated GPA-patients (n = 19) and matched HCs (n = 41). To determine the ex vivo effects of the active compounds of MMF and AZA, MPA and 6-MP respectively, on B-cell proliferation and cytokine production, PBMCs of untreated GPA-patients (n = 29) and matched HCs (n = 30) were cultured for 3-days in the presence of CpG-oligodeoxynucleotides (CpG) with MPA or 6-MP. After restimulation (with phorbol myristate acetate, calcium-ionophore), cytokine-positive B-cell frequencies were measured. Finally, to assess the effect of MMF or AZA treatment on in vitro B-cell proliferation and cytokine production, PBMCs of MMF-treated (n = 18), and AZA-treated patients (n = 28) and HCs (n = 41) were cultured with CpG. The memory B-cell frequency was increased in AZA- compared to MMF-treated patients, while no other subset was different. The active compounds of MMF and AZA showed in vitro that MPA decreased B-cell proliferation in GPA-patients and HCs. B-cell proliferation in MMF- and AZA-treated patients was not different. Finally, the IL-6+ B-cell frequency was decreased by MPA compared to 6-MP. No differences in IL-10+, IL-6+ or TNFα+ B-cell proportions or proliferation were found in MMF- and AZA-treated patients. Our results indicate that MMF could be superior to AZA in inhibiting B-cell cytokine production in GPA-patients. Future studies should assess the effects of these immunosuppressive drugs on other immune cells to elucidate mechanisms underlying the potential differences in relapse rates.