歯内療法由来の感染症における黒色色素細菌のマルチプレックスポリメラーゼ連鎖反応による検出

Multiplex polymerase chain reaction detection of black-pigmented bacteria in infections of endodontic origin.

抄録

本研究の目的は、マルチプレックスポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を用いて、臨床検体からPorphyromonas endodontalis、P. gingivalis、Prevotella intermedia、P. nigrescens、P. tanneraeの存在を検出することである。2つの異なるマルチプレックスPCRプロトコール（1つはPorphyromonas属2種用、もう1つはPrevotella属3種用）を用い、それぞれ各標的種に特異的なプライマーペアを使用した。結果は従来の培養法と比較された。患者からの感染根管および膿瘍40カ所から微生物サンプルを無菌的に採取した。サンプルは嫌気性条件下で培養し、Rapid ID 32 Aキットを用いて従来の方法で同定した。各サンプルから抽出したDNAを用いてMultiplex PCRを行った。Multiplex PCR法ではサンプルの65％（40検体中26検体）から、従来の培養法では15％（40検体中6検体）から、5種の黒色色素性細菌（BPB）のうち少なくとも1種が検出された。Multiplex PCR法は、従来の培養法よりも迅速、高感度、特異的かつ効果的にBPBを検出することができた。

The purpose of this study was to detect the presence of Porphyromonas endodontalis, P. gingivalis, Prevotella intermedia, P. nigrescens, and P. tannerae from clinical samples using multiplex polymerase chain reactions (PCR). Two different multiplex PCR protocols were used (one for the two Porphyromonas species and the other for the three Prevotella species), each one using a primer pair specific for each target species. The results were compared to those of the conventional culture procedures. Microbial samples were taken aseptically from 40 infected root canals and abscesses from patients. Samples were cultured in an anaerobic condition for conventional identification using a Rapid ID 32 A kit. Multiplex PCR was processed using the DNA extracted from each sample. At least one of the five species of black-pigmented bacteria (BPB) were detected in 65% (26 of 40) of the samples using multiplex PCR, and in 15% (6 of 40) using the conventional culture procedures. Multiplex PCR was more rapid, sensitive, specific, and effective in detecting BPB than the conventional culture procedures.