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トロンボキサンプロスタノイド受容体の活性化は内皮一酸化窒素依存性血管弛緩を損なう：Rhoキナーゼの役割
Thromboxane prostanoid receptor activation impairs endothelial nitric oxide-dependent vasorelaxations: the role of Rho kinase.
PMID: 19409373 DOI: 10.1016/j.bcp.2009.04.022.
抄録
トロンボキサンプロスタノイド（TP）受容体の活性化は強力な血管収縮を引き起こし、血管緊張と血圧の上昇に寄与する。本研究では、TP受容体を刺激すると、Rhoキナーゼ依存性のメカニズムを介して内皮の一酸化窒素による血管弛緩が阻害されるという仮説を検討した。スプラague-Dawleyラットの総頸動脈を分離し、ミオグラフに懸垂して等尺性張力の変化を測定した。一次培養大動脈内皮細胞における一酸化窒素の産生をイメージング技術を用いて測定し、内皮NOSのリン酸化レベルをウェスタンブロット分析によって決定した。9,11-ジデオキシ-11α,9α-エポキシ-メタノプロスタグランジンF（2α）（U46619）は、内皮の有無にかかわらず、リングにおいてイソプレナリン誘発性弛緩を阻害した。Rhoキナーゼ阻害剤、Y27632（2 microM）またはHA 1077（10 microM）で処理すると、プロテインキナーゼC阻害剤は効果がなかったのに対し、内皮のあるリングでのみU46619の効果が阻止された。Rhoキナーゼ阻害剤は、L-NAMEまたは1H-[1,2,4]オキサジゾロ[4,3-a]キノキサリン-1-オン（ODQ）で処理された内皮に接触したリングでは、イソプレナリン誘発性弛緩に影響を与えなかった。イソプレナリンは培養ラット内皮細胞の一酸化窒素（NO）産生量の上昇を刺激した。NO産生の増加はU46619（100nM）によって抑制され、この効果はY27632で処理することによって抑制されたが、細胞外カルシウムイオンが存在しない場合には影響を受けなかった。U46619はイソプレナリン刺激によるeNOSのリン酸化を減衰させたが、これはY27632とHA 1077による阻害に敏感であった。U46619はTP受容体アンタゴニストであるS18886によって阻害され、内皮細胞にTP受容体が存在することが確認された。以上の結果から、Rhoキナーゼの活性化が、U46619刺激による内皮NO産生の抑制と、それに続く内皮依存性のイソプレナリンに対する弛緩の主要なメカニズムである可能性が示唆された。
Activation of thromboxane prostanoid (TP) receptors causes potent vasoconstriction, which contributes to increased vascular tone and blood pressure. The present study examined the hypothesis that stimulation of TP receptor impaired endothelial nitric oxide-mediated vasorelaxation via a Rho kinase-dependent mechanism. The common carotid arteries of Sprague-Dawley rats were isolated and suspended in myograph for measurement of changes in isometric tension. The production of nitric oxide in primary cultured aortic endothelial cells was assayed with an imaging technique and phosphorylated levels of endothelial NOS were determined by Western blot analysis. 9,11-dideoxy-11alpha,9alpha-epoxy-methanoprostaglandin F(2alpha) (U46619) inhibited isoprenaline-induced relaxations in rings with or without endothelium. Treatment with Rho kinase inhibitors, Y27632 (2 microM) or HA 1077 (10 microM) prevented the effect of U46619 only in rings with endothelium while protein kinase C inhibitors were without effect. Rho kinase inhibitors did not affect isoprenaline-induced relaxations in endothelium-intact rings treated with L-NAME or 1H-[1,2,4]oxadizolo[4,3-a]quinoxalin-1-one (ODQ). Isoprenaline stimulated rises in nitric oxide (NO) production in cultured rat endothelial cells. The increased NO production was inhibited by U46619 (100 nM) and this effect was prevented by treatment with Y27632 but unaffected by the absence of extracellular calcium ions. U46619 attenuated isoprenaline-stimulated phosphorylation of eNOS, which was sensitive to inhibition by Y27632 and HA 1077. U46619-mediated effects were abolished by TP receptor antagonist, S18886 and the TP receptor was present in endothelial cells. The present results demonstrate that Rho kinase activation is likely to be the primary mechanism that underlies the U46619-stimulated TP-receptor-mediated inhibition of endothelial NO production and subsequent endothelium-dependent relaxations to isoprenaline.