免疫能力のある患者および免疫不全患者の末梢血を含む臨床検体中のBartonella henselae DNAの3つの入れ子増幅法による検出

Detection of Bartonella henselae DNA in clinical samples including peripheral blood of immune competent and immune compromised patients by three nested amplifications.

• Karina Hatamoto Kawasato
• Léa Campos de Oliveira
• Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho
• Lidia Yamamoto
• Gilda Maria Barbaro Del Negro
• Thelma Suely Okay

抄録

Bartonella属の細菌は，リンパ節生検や吸引液から検出された新たな病原体であり，おそらく細菌濃度の上昇が原因であると考えられる．バルトネラ症を示唆する臨床データ，検査データ，疫学データを有する18人の患者の23検体を，臨床検体での検出率を向上させるために，Bartonella henselaeの60kDaヒートショックタンパク質（HSP），内部転写スペーサー16S-23S rRNA（ITS），細胞分裂（FtsZ）のフラグメントを標的とした3つの入れ子増幅を行った．第1回目の増幅では，01，04，05検体がそれぞれHSP（4.3％），FtsZ（17.4％），ITS（21.7％）で陽性となった．2回目の増幅ではHSP（26％）、ITS（34.8％）、FtsZ（78.2％）の6検体が陽性となり、末梢血10検体、リンパ節生検5検体、皮膚生検2検体、リンパ節吸引1検体に対応していた。Nested-FtsZはNested-HSPやNested-ITSよりも感度が高く（p＜0.0001），18例中15例（83.3％）でBartonella henselaeのDNA検出が可能であった．本研究では，Bartonella henselaeの増幅に特異的であるべき3つのnested-PCRを開発したが，nested-FtsZのみがBartonella quintanaのDNAを増幅しなかった．これらの結果から，入れ子にした増幅はB. henselae DNAの検出率を高め，入れ子にしたFtsZが最も感度が高く，B. henselaeに特異的であることが明らかになった．また，nested-HSPおよびnested-ITSで検出された検体はすべてnested-FtsZであったことから，本研究ではBartonella henselaeによる感染が原因であることが推察された．陽性血液サンプルの数が多いことから，患者の免疫状態に関係なく，Bartonellosisの調査にこの生物学的材料を使用することに注意が払われている．この事実は、重症患者や幼児の場合、リンパ節生検や吸引などのより侵襲的な処置を避けるために重要です。

Bacteria of the genus Bartonella are emerging pathogens detected in lymph node biopsies and aspirates probably caused by increased concentration of bacteria. Twenty-three samples of 18 patients with clinical, laboratory and/or epidemiological data suggesting bartonellosis were subjected to three nested amplifications targeting a fragment of the 60-kDa heat shock protein (HSP), the internal transcribed spacer 16S-23S rRNA (ITS) and the cell division (FtsZ) of Bartonella henselae, in order to improve detection in clinical samples. In the first amplification 01, 04 and 05 samples, were positive by HSP (4.3%), FtsZ (17.4%) and ITS (21.7%), respectively. After the second round six positive samples were identified by nested-HSP (26%), eight by nested-ITS (34.8%) and 18 by nested-FtsZ (78.2%), corresponding to 10 peripheral blood samples, five lymph node biopsies, two skin biopsies and one lymph node aspirate. The nested-FtsZ was more sensitive than nested-HSP and nested-ITS (p < 0.0001), enabling the detection of Bartonella henselae DNA in 15 of 18 patients (83.3%). In this study, three nested-PCR that should be specific for Bartonella henselae amplification were developed, but only the nested-FtsZ did not amplify DNA from Bartonella quintana. We conclude that nested amplifications increased detection of B. henselae DNA, and that the nested-FtsZ was the most sensitive and the only specific to B. henselae in different biological samples. As all samples detected by nested-HSP and nested-ITS, were also by nested-FtsZ, we infer that in our series infections were caused by Bartonella henselae. The high number of positive blood samples draws attention to the use of this biological material in the investigation of bartonellosis, regardless of the immune status of patients. This fact is important in the case of critically ill patients and young children to avoid more invasive procedures such as lymph nodes biopsies and aspirates.