エチオピア南西部の家畜飼育者の知識・態度・習慣と相関するウシトリパノソーマのジミナゼンアセツル酸耐性のPCRおよびマイクロサテライト解析

PCR and microsatellite analysis of diminazene aceturate resistance of bovine trypanosomes correlated to knowledge, attitude and practice of livestock keepers in South-Western Ethiopia.

• Y Moti
• R De Deken
• E Thys
• J Van Den Abbeele
• L Duchateau
• V Delespaux

抄録

アフリカ動物トリパノソーマ症は、薬剤耐性が出現して以来、アフリカ大陸の他の家畜病よりもさらに深刻な農業生産と家畜の飼育を脅かしている。2012年11月から2013年5月にかけて、ジミナゼンアセトゥレート（DA）耐性を評価し、トリパノサイド薬の使用に対する家畜所有者の認識を評価するために、ジベ渓谷で縦断的な調査が実施された。4つの農民組合（PA）を厳選し、各PAの家畜を無作為にサンプリングした。研究開始時（t0）にヘマトクリット遠心分離法（HCT）でトリパノソーマ陽性のウシ106頭と陰性の対照牛119頭を、HCT、18S-PCR-RFLP、DpnII-PCR-RFLP、マイクロサテライト解析を用いて6ヶ月間追跡調査した。トリパノソーマ症の有病率はHCT法で18.1％，平均PCV値は23.6±5.1％であった．HCTで陽性となった106頭のうち，18S-PCR-RFLPでトリパノソーマが陽性となったのは64頭（60.4％）であった．検出された種は、Trypanosoma congolense savannahが38種（59.4％）、Trypanosoma vivaxが18種（28.1％）、Trypanosoma theileriが5種（7.8％）、T. congolense Kilifiが3種（4.7％）であった。T. congolense サバンナ検体のうち，31検体（81.6％）がDA耐性のRFLPプロファイルを示し，2検体（5.3％）が混合プロファイルを示し，5検体はDpnII-PCR-RFLPを用いて増幅しなかった．陽性HCTはPCVに有意な影響を及ぼし（p<0.001），平均PCV値はトリパノソーマ非存在下では24.4±0.2％，トリパノソーマ存在下では20.9±0.3％であった．PCVは投与1ヵ月後に4.4±0.5％と有意に増加した（p<0.001）。すべてのT. congolenseサバンナ型をマイクロサテライトマーカーTCM1、TCM3、TCM4を用いて解析した。主なイベントは新規感染（40.0％）と再発（37.5％）であり、治癒率は22.5％と低かった。厳選された10のPAでは、半構造化された質問票が使用された。その結果、平均個体数はアベルティ地区が最も多く（6.7±1.8TLU）、平均個体数は10地区で統計的に異なっていた（p=0.01）。トリパノソーマ症は、回答者の 97%が主な疾病としていた。トリパノソーマ症は、95.5％の農家が使用していたが、半数以上の農家（51.9％）がイソメタミディウム（ISM）をよく知らないと回答した。若い小動物への過剰投与と大型動物への過少投与の傾向が見られた。牛の治療は非常に頻繁に行われ（1 年に 20 回近く）、子牛の治療はほとんど行われていませんでした。ジベ谷の状況を改善するためには、薬剤の合理的な使用、家畜管理の改善、戦略的な媒介防除法の適用を促進するための普及啓発メッセージを伝える必要があります。

African Animal Trypanosomosis is threatening the agricultural production and cattle breeding more severely than any other livestock disease in the continent, even more since the advent of drug resistance. A longitudinal study was conducted from November 2012 to May 2013 in the Ghibe valley to evaluate diminazene aceturate (DA) resistance and assess livestock owner's perception of trypanocidal drug use. Four Peasant Associations (PAs) were purposively selected and the cattle randomly sampled in each PAs. At the beginning of the study (t0), 106 bovines positive for trypanosomes by the haematocrit centrifugation technique (HCT) and 119 negative control animals were recruited for six months follow-up using HCT, 18S-PCR-RFLP, DpnII-PCR-RFLP and microsatellite analysis. Prevalence of trypanosomosis was 18.1% based on the HCT technique and the mean PCV value was 23.6±5.1% for the 587 sampled cattle. Out of the 106 HCT positive, 64 (60.4%) were positive for the presence of trypanosomes using the 18S-PCR-RFLP. Species detection showed 38 (59.4%) Trypanosoma congolense savannah, 18 (28.1%) Trypanosoma vivax, 5 (7.8%) Trypanosoma theileri and 3 (4.7%) T. congolense Kilifi. Among the T. congolense savannah samples, 31 (81.6%) showed a DA resistant RFLP profile, 2 (5.3%) a mixed profile and 5 did not amplify using the DpnII-PCR-RFLP. A positive HCT had a significant effect on PCV (p<0.001) with the mean PCV value equal to 24.4±0.2% in the absence of trypanosomes and to 20.9±0.3% in the presence of trypanosomes. PCV increased significantly (p<0.001) with 4.4±0.5% one month after treatment. All T. congolense savannah type were analyzed using microsatellite markers TCM1, TCM3 and TCM4. The main events were new infections (40.0%) and relapses (37.5%) with cures lagging at 22.5%. In 10 purposively selected PAs a semi-structured questionnaire was used. The average herd size was the highest in Abelti PA (6.7±1.8 TLU) and the mean herd size was statistically different (p=0.01) in the 10 PAs. Trypanosomosis was designated as the main disease affecting cattle by 97% of the respondents. DA was used by 95.5% of the farmers though more than half of them (51.9%) were not familiar with isometamidium (ISM). There was a trend to overdose young small animals and to underdose large ones. Oxen were treated very frequently (nearly 20 times/year) and calves almost never. To improve the situation in the Ghibe valley, extension messages should be delivered to promote a rational drug use, improved livestock management and the application of strategic vector control methods.

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