特発性小児高カルシウム血症の改善されたスクリーニング検査で、影響を受けた患者の血清24,25-(OH)Dの残存濃度が確認される

Improved Screening Test for Idiopathic Infantile Hypercalcemia Confirms Residual Levels of Serum 24,25-(OH) D in Affected Patients.

• Martin Kaufmann
• Nicole Morse
• Billy Joe Molloy
• Donald P Cooper
• Karl Peter Schlingmann
• Arnaud Molin
• Marie Laure Kottler
• J Christopher Gallagher
• Laura Armas
• Glenville Jones

抄録

CYP24A1変異は、特発性乳児高カルシウム血症（IIH）の原因として認められている。25-OH-D :24,25-(OH) D比(R)の測定が可能な高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（LC-MS/MS）をベースとした血液検査は、生体内でCYP24A1による25-OH-DのC24-水酸化の減少に基づいてIIH患者を識別することができる。この比の値はIIHでは有意に上昇しているが、驚くべきことに血清中の24,25-(OH)Dは依然として検出可能である。本研究では、特定のCYP24A1遺伝子型を持つ個人におけるCYP24A1酵素活性の残存、代替C24-ヒドロキシラーゼの発現、およびLC-MS/MSにおける24,25-(OH)Dピークの等塩基性汚染の可能性を含めて、このことを説明するための可能性を探っている。我々は、CYP24A1またはSLC34A1の変異によるIIH患者、影響を受けていないヘテロ接合体および透析患者、ビタミンD欠乏症患者、および25-OH-Dレベルの幅広い範囲を示す健常者の血清ビタミンD代謝物を調べるために、LC-MS/MSを20分間延長して使用した。我々は、24,25-(OH)Dピークの汚染物質として25,26-(OH)Dを同定した。正常者では24,25-(OH)D濃度は25,26-(OH)Dを大きく上回っていたが、CYP24A1変異を持つIIHや透析患者では25,26-(OH)Dがより顕著になり、CYP24A1機能が低下すると24,25-(OH)D濃度が低くなることが明らかになった。IIH-CYP24A1患者30人の平均Rは700（範囲、166～2168；カットオフ=140）であり、対照群163人の31人と比較した。さらに、CYP24A1のL409S対立遺伝子を持つ患者では、他の変異を持つ患者に比べて24,25-(OH)Dレベルが高く、Rが低かった（平均R=268、n=8）。24,25-(OH)Dを25,26-(OH)Dから分離するクロマトグラフィー法は、CYP24A1活性が変化した病態を鑑別するために使用できる、より正確なRが得られると結論づけた。IIH患者における残留血清24,25-(OH)Dの起源は、多因子性であるように思われる。 © 2017 American Society for Bone and Mineral Research.

CYP24A1 mutations are now accepted as a cause of idiopathic infantile hypercalcemia (IIH). A rapid liquid-chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)-based blood test enabling measurement of the 25-OH-D :24,25-(OH) D ratio (R) can identify IIH patients on the basis of reduced C24-hydroxylation of 25-OH-D by CYP24A1 in vivo. Although values of this ratio are significantly elevated in IIH, somewhat surprisingly, serum 24,25-(OH) D remains detectable. The current study explores possible explanations for this including: residual CYP24A1 enzyme activity in individuals with certain CYP24A1 genotypes, expression of alternative C24-hydroxylases, and the possibility of isobaric contamination of the 24,25-(OH) D peak on LC-MS/MS. We employed an extended 20-min run time on LC-MS/MS to study serum vitamin D metabolites in patients with IIH due to mutations of CYP24A1 or SLC34A1; in unaffected heterozygotes and dialysis patients; in patients with vitamin D deficiency; as well as in normal subjects exhibiting a broad range of 25-OH-D levels. We identified 25,26-(OH) D as a contaminant of the 24,25-(OH) D peak. In normals, the concentration of 24,25-(OH) D greatly exceeds 25,26-(OH) D ; however, 25,26-(OH) D becomes more significant in IIH with CYP24A1 mutations and in dialysis patients, where 24,25-(OH) D levels are low when CYP24A1 function is compromised. Mean R in 30 IIH-CYP24A1 patients was 700 (range, 166 to 2168; cutoff = 140) as compared with 31 in 163 controls. Furthermore, patients possessing CYP24A1 L409S alleles exhibited higher 24,25-(OH) D levels and lower R (mean R = 268; n = 8) than patients with other mutations. We conclude that a chromatographic approach which resolves 24,25-(OH) D from 25,26-(OH) D produces a more accurate R that can be used to differentiate pathological states where CYP24A1 activity is altered. The origin of the residual serum 24,25-(OH) D in IIH patients appears to be multifactorial. © 2017 American Society for Bone and Mineral Research.

© 2017 American Society for Bone and Mineral Research.