SSeCKS/AKAP12の足場機能は、常駐線維芽細胞によるCXCL9/10分泌を減衰させることで、B16F10誘導腹膜転移を抑制する

SSeCKS/AKAP12 scaffolding functions suppress B16F10-induced peritoneal metastasis by attenuating CXCL9/10 secretion by resident fibroblasts.

• Masashi Muramatsu
• Lingqiu Gao
• Jennifer Peresie
• Benjamin Balderman
• Shin Akakura
• Irwin H Gelman

抄録

SSeCKS/Gravin/AKAP12（SSeCKS）は、腫瘍内在性PKCおよびSrc介在性シグナル伝達経路を減衰させることで転移を抑制することが知られているキナーゼ足場タンパク質である[1]。転移細胞でのダウンレギュレーションに加えて、前立腺がんや乳がん由来のストロマでもSSeCKSのダウンレギュレーションが確認されており、微小環境細胞が悪性腫瘍を制御する役割を果たしていることが示唆されている。同所性のB16F10およびSM1WT1[]マウスメラノーマ腫瘍は、同系統のWTマウスまたはSSeCKSヌル（KO）マウスでも同様に増殖したが、KOマウス宿主は腹膜転移のレベルが5～10倍高く、この亢進は、ナイーブのWTマウスに腹膜液（PF）を事前に注入することで採用的に移行することができたが、ナイーブのKOマウスから非付着性腹膜細胞（PC）を注入することはできなかった。B16F10およびSM1WT1細胞は、KO-PFへの走化性がWT-PFに比べて増加し、これはCxcr3リガンドであるCxcl9および10を含む複数の炎症性メディエーターのPFレベルの増加に対応していた。KO-PCではなく、KO-PMFの腹膜線維芽細胞からのコンディショニング培地は、コントロールよりもB16F10の走化性を増加させたが、これはCxcl10中和抗体でブロックすることができた。KO-PMFは、老化マーカーであるSA-β-ガラクトシダーゼ、p21およびp16の増加したレベルを示し、炎症性メディエーター、リポ多糖、TNFα、IFNαおよびIFNγによって誘導されたCxcl10分泌の増強を示した。SSeCKS足場サイト変異体と低分子キナーゼ阻害剤を用いて、SSeCKS制御のPKC、PKA、PI3K/Akt経路の喪失がCxcl10分泌の亢進に関与していることを示した。これらのデータは、特に腹膜における腫瘍化学吸引剤の分泌を促進するシグナル伝達経路を減衰させることにより、転移抑制における間質SSeCKS/AKAP12の役割を初めて明らかにしたものである。

SSeCKS/Gravin/AKAP12 (SSeCKS) is a kinase scaffolding protein known to suppress metastasis by attenuating tumor-intrinsic PKC- and Src-mediated signaling pathways [1]. In addition to downregulation in metastatic cells, analyses identified SSeCKS downregulation in prostate or breast cancer-derived stroma, suggesting a microenvironmental cell role in controlling malignancy. Although orthotopic B16F10 and SM1WT1[] mouse melanoma tumors grew similarly in syngeneic WT or SSeCKS-null (KO) mice, KO hosts exhibited 5- to 10-fold higher levels of peritoneal metastasis, and this enhancement could be adoptively transferred by pre-injecting naïve WT mice with peritoneal fluid (PF), but not non-adherent peritoneal cells (PC), from naïve KO mice. B16F10 and SM1WT1 cells showed increased chemotaxis to KO-PF compared to WT-PF, corresponding to increased PF levels of multiple inflammatory mediators, including the Cxcr3 ligands, Cxcl9 and 10. knockdown abrogated enhanced chemotaxis to KO-PF and peritoneal metastasis in KO hosts. Conditioned media from KO peritoneal membrane fibroblasts (PMF), but not from KO-PC, induced increased B16F10 chemotaxis over controls, which could be blocked with Cxcl10 neutralizing antibody. KO-PMF exhibited increased levels of the senescence markers, SA-β-galactosidase, p21 and p16, and enhanced Cxcl10 secretion induced by inflammatory mediators, lipopolysaccharide, TNFα, IFNα and IFNγ. SSeCKS scaffolding-site mutants and small molecule kinase inhibitors were used to show that the loss of SSeCKS-regulated PKC, PKA and PI3K/Akt pathways are responsible for the enhanced Cxcl10 secretion. These data mark the first description of a role for stromal SSeCKS/AKAP12 in suppressing metastasis, specifically by attenuating signaling pathways that promote secretion of tumor chemoattractants in the peritoneum.