Mir-206は、筋緊張性ジストロフィーの細胞モデルにおいて、CUGBP1の蓄積を阻害することにより、筋形成不全を部分的に救済することができる

Mir-206 partially rescues myogenesis deficiency by inhibiting CUGBP1 accumulation in the cell models of myotonic dystrophy.

• Wei Dong
• Xuanying Chen
• Menghong Wang
• Zeqi Zheng
• Xing Zhang
• Qunlin Xiao
• Xiaoping Peng

抄録

本研究では、CUG 拡張と Celf1 の豊富さが正常な心筋細胞の分化をどのように制御しているかを明らかにし、筋緊張性ジストロフィーにおけるmiR-206 の役割を明らかにし、遺伝子治療ベクターの可能性を探ることを目的としています。我々は、DM1 の筋細胞分化不全を模倣するために、CUG 拡張と Celf1 の過剰発現 C2C12 細胞モデルを設定し、AdvmiR-206 を細胞モデルにトランスフェクションし、RT-PCR とウェスタンブロッティングで筋原性マーカー MyoD, MyoG, Mef2c, Celf1 のレベルをテストし、ミオシン重鎖免疫染色で筋管形成を検出しました3。3.UTR CUG-拡大は筋管の欠損と筋芽細胞の分化障害をもたらす。Celf1 の過剰発現は筋芽細胞の分化を阻害し、分化を阻害する。Celf1のノックダウンは、CUG-expansionを持つ筋芽細胞の分化障害を部分的に回復させることがわかった。 内因性の時間パターンを模倣した異所性のmiR-206は、Celf1の蓄積を刺激することで筋原性欠損を是正するためにMyoDの発現を促進することで、筋芽細胞の系統を増強する筋細胞プログラムを特異的に駆動していると考えられる。筋緊張性ジストロフィー１型）；ＧＦＰ：（緑色蛍光タンパク質）；ＲＴ-ＰＣＲ．定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応）；ｓｈＲＮＡ．ショートヘアピンRNA）。

In this study, we aim to determine how CUG-expansion and the abundance of Celf1 regulates normal myocyte differentiation and reveal the role ofmiR-206 in myotonic dystrohy and explore a possible gene therapy vector.  we set up CUG-expansion and Celf1 overexpression C2C12 cell models to imitate the myocyte differentiation defects of DM1, then transfected AdvmiR-206 into cell models, tested the level of myogenic markers MyoD, MyoG, Mef2c, Celf1 by RT-PCRand Western Blotting, detected myotube formation by myosin heavy chain immunostaining.  3'-UTR CUG-expansion leads to myotube defects and impaired myoblasts differentiation. Overexpression of Celf1 inhibits myoblast differentiation and impairs differentiation. Knockdown of Celf1 partially rescues differentiation defects of myoblasts harboring CUG-expansion. miR-206 incompletely reverses myoblast differentiation inhibition induced by CUG-expansion and partially recuses myoblast differentiation defects induced by Celf1 overexpression. Ectopic miR-206 mimicking the endogenous temporal patterns specifically drives a myocyte program that boosts myoblast lineages, likely by promoting the expression of MyoD to rectify the myogenic deficiency by stimulating the accumulation of Celf1. : DMPK: (dystrophia myotonica protein kinase); 3'-UTR: (3'-untranslated region); MBNL1: (muscleblind-like [Drosophila]); DM1: (myotonic dystrophy type 1); GFP: (green fluorescent protein); RT-PCR: (quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction); shRNA: (short hairpin RNA).