標的型次世代シークエンシングによる低リン血症性くる病に罹患した4つの血統の変異解析

[Mutation analysis of four pedigrees affected with hypophosphatemic rickets through targeted next-generation sequencing].

• Ying Bai
• Ning Liu
• Mingwei Shao
• Guijun Qin
• Xu Gao
• Xiangdong Kong

抄録

目的:

低リン血症性くる病（HR）に罹患した 4 つの血統における PHEX 遺伝子の潜在的変異を検出し、妊娠 13 週目の胎児の出生前診断を行うこと。

OBJECTIVE: To detect potential mutations of PHEX gene in four pedigrees affected with hypophosphatemic rickets (HR) and provide prenatal diagnosis for a fetus at 13th gestational week.

方法:

プロバンドのPHEX、FGF23、DMP1、ENPP1、CLCN5およびSLC34A3遺伝子のコーディング領域およびエクソン/イントロン境界を標的型次世代シークエンシング(NGS)により解析した。変異の疑いがあると思われる遺伝子は、影響を受けていない近親者と200人の無縁の健常者を対象としたサンガーシークエンシングにより確認された。欠失は、プローブ子、影響を受けていない親族、および血縁関係のない健常者20人のマルチプレックスライゲーション依存性プローブ増幅（MLPA）検出によって確認された。リスクの高い胎児の出生前診断は、MLPA解析により実施した。

METHODS: The coding regions and exon/intron boundaries of PHEX, FGF23, DMP1, ENPP1, CLCN5 and SLC34A3 genes of the probands were analyzed by targeted next-generation sequencing (NGS). Suspected mutations were verified by Sanger sequencing among unaffected relatives and 200 unrelated healthy individuals. Deletions were confirmed by multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) detection of probands, unaffected relatives and 20 unrelated healthy individuals. Prenatal diagnosis for a fetus with high risk was carried out through MLPA analysis.

結果:

血統書からは、c.850-3C>G、エクソン11欠失、エクソン13欠失、c.1753G>A(p.G585R)の4つのPHEX変異が検出された。これらのうち、エクソン11欠失、エクソン13欠失、c.1753G>A(p.G585R)は新規変異であり、未感染親族や健常対照者には見られなかった。血統書3では、胎児に同じ変異は認められなかった。

RESULTS: Four PHEX mutations were respectively detected in the pedigrees, which included c.850-3C>G, exon 11 deletion, exon 13 deletion and c.1753G>A (p.G585R). Among these, exon 11 deletion, exon 13 deletion and c.1753G>A (p.G585R) were novel mutations and not found among unaffected relatives and healthy controls. In pedigree 3, the same mutation was not found in the fetus.

結論:

PHEX遺伝子の変異がこの疾患の原因であると考えられる。NGSとSanger塩基配列解析および/またはMLPA検出を組み合わせることで、本疾患の正確な診断が可能になると考えられます。

CONCLUSION: Mutations of the PHEX gene probably underlies the disease among the four pedigrees. NGS combined with Sanger sequencing and/or MLPA detection can ensure accurate diagnosis for this disease.