歯肉縁下プラークサンプル中のAggregatibacter actinomycetemcomitans、Porphyromonas gingivalis、Tannerella forsythiaの検出および定量を目的としたマルチプレックスqPCRアッセイの検証。嫌気培養との比較

Validation of a multiplex qPCR assay for detection and quantification of Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis and Tannerella forsythia in subgingival plaque samples. A comparison with anaerobic culture.

抄録

目的:

歯肉縁下サンプル中のAggregatibacter actinomycetemcomitans、Porphyromonas gingivalis、Tannerella forsythiaを同時に検出・定量するためのマルチプレックスリアルタイムqPCR（m-qPCR）アッセイを、嫌気培養と比較して検証すること。

OBJECTIVE: To validate a multiplex real time qPCR (m-qPCR) assay for the simultaneous detection and quantification of Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis and Tannerella forsythia in subgingival samples, when compared with anaerobic culture.

材料と方法:

歯周治療を希望する患者から歯肉縁下プラークサンプルを採取した。嫌気培養とm-qPCRを並行して行い、対象菌種を検出した。検出菌数と検出頻度を算出し、それぞれMann-Whitney Uおよびカイ二乗検定により解析した。分割表を作成し、感度、特異度、予測値、およびLinの相関係数を算出した。

MATERIAL AND METHODS: Subgingival plaque samples were obtained from patients seeking periodontal treatment. Samples were processed in parallel by anaerobic culturing and by m-qPCR directed to the target bacterial species. Counts and frequency of detection were calculated and analyzed by Mann-Whitney U and chi-square tests, respectively. Contingency tables were constructed, and sensitivity, specificity, predictive values and Lin's correlation coefficients were calculated.

結果:

59検体が研究に組み入れられた。A. actinomycetemcomitansおよびP. gingivalisについては、m-qPCRと培養との間に良好な一致が得られた（正味一致率、それぞれ94.92％および91.53％）。T. forsythiaについては、m-qPCRは培養よりも統計学的に有意に高い菌数を示し（p<0.005）、特異度（3.12％）および一致度（47.46％）は低かった。高感度（96.22％以上）は、m-qPCRで3つの標的細菌について達成された。

RESULTS: Fifty-nine samples were included in the study. A good concordance was achieved between m-qPCR and culture for A. actinomycetemcomitans and P. gingivalis (net agreement, 94.92% and 91.53%, respectively). For T. forsythia, m-qPCR showed statistically significant higher counts than culture (p < 0.005), and low specificity (3.12%) and concordance (47.46%). High sensitivity (above 96.22%) was attained for the three target bacteria with m-qPCR.

結論:

培養法と比較して、歯肉縁下プラークサンプルを対象としたm-qPCR法は、A. actinomycetemcomitans、P. gingivalisおよびT. forsythiaの同時定量において高い感度を示した。

CONCLUSION: Compared to culture, the tested m-qPCR assay for subgingival plaque samples showed high degree of sensitivity in the simultaneous quantification of A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis and T. forsythia.