-254C>G SNPはNF-BサブユニットRELAとの相互作用を介してその発現に影響を与える

-254C>G SNP in the Gene Promoter Influences Its Expression via Interaction with the NF-B Subunit RELA in Steroid-Resistant Nephrotic Syndrome Children.

• Xinyu Kuang
• Qian Zhou
• Zhuying Li
• Yujie Hu
• Yulin Kang
• Wenyan Huang

抄録

本研究は、中国のステロイド抵抗性ネフローゼ症候群児において、一過性受容体電位陽イオンチャネル6（）遺伝子プロモーター上の-254C>G一塩基多型（SNP）が、その活性化を増加させるメカニズムを探ることを目的としている。プロモーター領域を含むプラスミド（-254CまたはG対立遺伝子を有する）を構築し、ヒト胚性腎臓（HEK）293T細胞およびヒトポッドサイトにトランスフェクションした。ルシフェラーゼアッセイを用いて、腫瘍壊死因子-（ＴＮＦ-）処理の有無にかかわらず両細胞株におけるプロモーター活性を試験し、クロマチン免疫沈降-ポリメラーゼ連鎖反応（ＣｈＩＰ-ＰＣＲ）分析を用いて、この変異配列に結合し得る転写因子を確認した。ルシフェラーゼの結果から、両細胞株において、変異体プロモーターの活性は、同遺伝子の正常プロモーターの活性よりも高いことが示された。さらに、この変異が核内因子κB（NF-B）サブユニットRELAによって媒介されていることを予測し、検証したところ、TNF-は-254G対立遺伝子の転写活性を有意に増強した。結論として、-254C>G SNPはこの遺伝子の機能獲得変異であり、中国小児のステロイド抵抗性ネフローゼ症候群（SRNS）を予測するための早期かつ有効な因子であることが示唆された。

This study is aimed at exploring the mechanism by which the -254C>G single nucleotide polymorphism (SNP) on the transient receptor potential cation channel 6 () gene promoter could increase its activation in steroid-resistant nephrotic syndrome children of China. Plasmids containing the promoter region (with the -254C or G allele) were constructed and then transfected into human embryonic kidney (HEK) 293T cells and human podocytes. Luciferase assays were used to test the promoter activity in both cell lines with or without tumor necrosis factor- (TNF-) treatment, and chromatin immunoprecipitation-polymerase chain reaction (ChIP-PCR) analysis was used to verify the transcription factor that could bind to this mutant sequence. Luciferase results indicate that the activity of the mutant promoter was greater than that of the normal promoter of the gene in both cell lines. We further predicted and verified that this variation was mediated by the nuclear factor kappa B (NF-B) subunit RELA, and TNF- significantly enhanced the transcription activity of with the -254G allele. In conclusion, the -254C>G SNP is a gain-of-function variation of the gene, and it is also an early and effective factor for predicting steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS) in Chinese children.