個々の宿主の胃食道粘膜におけるテトラサイクリンに対する感受性と耐性の低下に関連する分離株の16S単一変異のリアルタイムPCR検出

Real-time PCR detection of a 16S single mutation of isolates associated with reduced susceptibility and resistance to tetracycline in the gastroesophageal mucosa of individual hosts.

• Monica Contreras
• Lucie Benejat
• Heisser Mujica
• Jessy Peña
• María-Alexandra García-Amado
• Fabian Michelangeli
• Philippe Lehours

抄録

テトラサイクリンに対する耐性の分子機構は，リボソームの一次結合部位の変異が関与している。テトラサイクリンに対する耐性や感受性の低下は，テトラサイクリンの16S遺伝子の一重，二重，三重変異の結果である可能性がある． ベネズエラの個体宿主の胃食道粘膜から分離された96株について，遺伝子型とテトラサイクリン耐性との相関性を表現型的に検討した．8名の消化器病患者から分離された96.0株（肛門から48株，食道から48株）について，抗菌薬感受性試験のE-testおよび16S遺伝子変異の検出のためのリアルタイムPCRを行った。胃粘膜ではE-testで感受性38株，テトラサイクリン耐性10株が確認されたが，食道では感受性44株，耐性4株が確認された。16S遺伝子のリアルタイムPCR法による検出では，6株の肛門と7株の食道で一塩基対置換型（AGAGGA）の変異株が検出されたが，テトラサイクリン耐性は3株のみであった。以上の結果から，16SのリアルタイムPCR検出は，テトラサイクリン耐性遺伝子型を分類するための信頼性の高い方法であり，3剤併用療法で第一選択治療に失敗した患者に有用であることが示唆された。

The molecular mechanism of resistance to tetracycline involves mutations in the primary binding site of the ribosome. A resistance or reduced susceptibility to tetracycline could be the result of single, double or triple mutations in the 16S gene of . We investigated if the genotype was correlated to tetracycline resistance as determined phenotypically for 96 . isolates in the gastroesophageal mucosa of Venezuelan individual hosts. E-test for antimicrobial susceptibility test and real-time PCR for the detection of 16S gene mutations were performed in 96 . isolates (48 obtained from antrum, and 48 from oesophagus) from eight dyspeptic patients. In the gastric mucosa, 38 isolates were identified sensitive and 10 resistant to tetracycline by E-test, whereas 44 sensitive and 4 resistant isolates were found in the oesophagus. Real-time PCR detection of the 16S gene exhibited mutants with a single base-pair substitution (AGAGGA) in six antrum isolates and seven oesophagus isolates, whereas only three harboured a low level of tetracycline resistance . Our results indicate that real-time PCR detection of 16S is a reliable method to classify among tetracycline-resistant genotypes and useful in patients who have experienced a first-line treatment failure with triple therapy.