Sfax（チュニジア）の太陽船尾から極めて好塩性の古細菌 Halobacterium salinarum ETD5 は複数のハロシンを産生する

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Res. Microbiol..2020 Mar;171(2):80-90. S0923-2508(19)30097-X. doi: 10.1016/j.resmic.2019.09.003.Epub 2019-09-24.

Sfax（チュニジア）の太陽船尾から極めて好塩性の古細菌 Halobacterium salinarum ETD5 は複数のハロシンを産生する

The extremely halophilic archaeon Halobacterium salinarum ETD5 from the solar saltern of Sfax (Tunisia) produces multiple halocins.

Fadoua Ghanmi
Alyssa Carré-Mlouka
Zied Zarai
Hafedh Mejdoub
Jean Peduzzi
Sami Maalej
Sylvie Rebuffat

PMID: 31560985 DOI: 10.1016/j.resmic.2019.09.003.

抄録

極めて好塩性の古細菌Halobacterium salinarum ETD5株は、以前にSfax（チュニジア）の太陽船尾から分離され、ハロシンS8をコードして発現していることが示されています。サリナラムETD5株の培養上清は，いくつかの好塩性古細菌や異なる属の細菌に対して高い抗菌活性を示し，領域横断的な阻害作用を示した．この抗菌活性はプロテアーゼによって破壊されたため，ハロシンを示唆するものであった。2つのクロマトグラフィーステップを用いたバイオガイデッド精製法を適用し、Halorubrum chaoviator ETR14を対象とした抗菌アッセイを行った。ゲル内スクリーニングアッセイでは、約8kDaと14kDaの2つの抗菌性バンドが存在することが示され、N末端配列決定と質量分析によってその特徴が調べられた。8kDaのハロシンバンドには、未同定のハロアカヒオンS8aから報告されている36アミノ酸の短長さのハロシンS8とは異なる、81アミノ酸を含む完全長型のハロシンS8が同定された。我々がハロシンS14と呼んでいる新規なハロシンが14kDaのバンドで発見された。このハロシンは、古細菌のMn-スーパーオキシドジスムターゼのN末端切断領域とアミノ酸配列が同一であることを示した。これらの結果から、Hbt. salinarum ETD5は、これまで古細菌領域では報告されていなかった複数のハロシンを産生していることが明らかになりました。

The extremely halophilic archaeon Halobacterium salinarum strain ETD5 was previously isolated from the solar saltern of Sfax (Tunisia) and shown to encode and express halocin S8. The Hbt. salinarum ETD5 culture supernatant was shown here to exhibit high antimicrobial activity against several halophilic archaea and bacteria of different genera, showing a cross-domain inhibition. The antimicrobial activity was destroyed by proteases, thus pointing to halocins. A bioguided purification procedure was applied using two chromatography steps and antimicrobial assays directed against Halorubrum chaoviator ETR14. In-gel screening assay showed the presence of two antimicrobial bands of approximately 8 and 14 kDa, for which characterization was investigated by N-terminal sequencing and mass spectrometry. The full-length form of halocin S8 that contains 81 amino acids and differs from the 36 amino acid short-length halocin S8 previously described from an uncharacterized haloarchaeon S8a, was identified in the 8 kDa halocin band. A novel halocin that we termed halocin S14 was found in the 14 kDa band. It exhibits amino acid sequence identities with the N-terminally truncated region of the archaeal Mn-superoxide dismutase. These results show that Hbt. salinarum ETD5 produces multiple halocins, a feature that had not been described until now in the domain Archaea.