ウサギにおけるヒトκ軽鎖に対するポリクローナル抗体の開発と特性評価

Development and characterization of polyclonal antibody against human kappa light chain in rabbit.

• Mojgan Esparvarinha
• Hamid Nickho
• Leili Aghebati-Maleki
• Jalal Abdolalizadeh
• Hadi Nasiri
• Zahra Valedkarimi
• Jafar Majidi

抄録

遊離軽鎖を産生する疾患の診断には、κ軽鎖に対するポリクローナル抗体が用いられる。カッパ軽鎖とラムダ軽鎖は免疫グロブリン合成の産物であり、正常な状態では血清、脳脊髄液、尿、滑液などの微量ながら循環に放出されるが、カッパ軽鎖とラムダ軽鎖は免疫グロブリン合成の産物であり、正常な状態では血清、脳脊髄液、尿、滑液などの微量ながら循環に放出される。本研究の目的は、ヒトκ軽鎖に対するポリクローナル免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）の産生と精製であった。本研究では、初期のヒトＩｇＧをイオン交換クロマトグラフィーで精製し、ジチオスレイトールで還元し、サイズ排除クロマトグラフィーで重鎖と軽鎖を分離した。その後、pH2.00のプロテインL Sepharoseを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより、ヒト血清からの免疫グロブリンのκ軽鎖の分離精製が支配的な条件であることが示された。最終的に、ウサギをヒトκ軽鎖で免疫化した。ウサギＩｇＧを精製し、ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した。ヒトκ軽鎖に対するＨＲＰ抱合ウサギＩｇＧの力価を決定するために、直接酵素結合免疫吸着アッセイを計画した。抗カッパIgGの最適力価は1:16000であった。この結果、精製ポリクローナル抗カッパは、生物医学・生化学研究や診断キットの開発に有用であることがわかった。

Polyclonal antibodies against kappa light chain are used to diagnose diseases producing free light chain. The kappa and lambda light chains are products of immunoglobulin synthesis and released into the circulation in minor amounts such as serum, cerebrospinal fluid, urine and synovial fluid in normal condition. The purpose of this study was the production and purification of polyclonal immunoglobulin G (IgG) against human kappa light chains. In this study, early human IgG was purified by ion-exchange chromatography, reduced with Dithiothreitol and heavy and light chains were separated with size-exclusion chromatography. Afterward, affinity chromatography with protein L Sepharose at pH 2.00 was displayed to be a dominant condition for the separation and purification of the kappa light chain of immunoglobulins from human serum. Eventually, the rabbit was immunized by human kappa light chains. The rabbit IgG was purified and labeled with horseradish peroxidase (HRP). Direct enzyme-linked immunosorbent assay was planned to determine the titer of HRP conjugated rabbit IgG against the human kappa light chain. The optimum titer of anti-kappa IgG was 1:16000. At the result, purified polyclonal anti-kappa is useful tool in biomedical and biochemical researches and diagnostic kits.

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