TAK-242 のラット眼におけるテノンカプセル線維芽細胞増殖抑制効果

Inhibitive effect of TAK-242 on Tenon's capsule fibroblasts proliferation in rat eyes.

• Liang Liang
• Meng-Nan Zhu
• Bao-Ji Chen
• Zheng Wang
• Li-Ye He
• Rang Zhang

抄録

エイム:

TAK-242 のラット眼球テノンカプセル線維芽細胞の増殖抑制効果を調べるために、TAK-242 を用いて、Toll-like receptor 4 (TLR4) シグナル伝達経路の阻害効果を調べた。

AIM: To study the inhibition effect of TAK-242 on the proliferation of rat eye Tenon's capsule fibroblasts the toll-like receptor 4 (TLR4) signaling pathway.

方法:

SD ラットテノンカプセル線維芽細胞を抽出・培養し、正常対照群、リポ多糖（LPS）群（10g/mL LPS）、TAK-242群（1μmol/L TAK-242、30分後に10μg/mL LPS）に分け、各群のTLR4、トランスフォーミング成長因子-β1（TGF-β1）、インターロイキン-6（IL-6）の発現を検出した。各群のTLR4、トランスフォーミング増殖因子-β1（TGF-β1）及びインターロイキン-6（IL-6）の発現をウエスタンブロット及び逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）により検出した。また、細胞増殖はセルカウンティングキット8（CCK-8）を用いて検出した。

METHODS: SD rat Tenon's capsule fibroblasts were extracted and cultured, then the cells were divided into normal control group, lipopolysaccharide (LPS) group (10 g/mL LPS) and TAK-242 group (1 µmol/L TAK-242, and 10 µg/mL LPS after 30min). The expressions of TLR4, transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and interleukin-6 (IL-6) in each group were detected by Western blot and reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Cell proliferation was detected by cell counting kit-8 (CCK-8).

結果:

抽出した細胞を二重免疫蛍光標識したところ、ケラチンは陰性、ビメンチンは陽性であった。ウェスタンブロットの結果、LPS群ではTLR4とTGF-β1の発現が最も高かった（<0.01）。また、酵素連結免疫吸着法(ELISA)により、IL-6の分泌量はLPS群が最も多く(<0.01)、TLR4とTGF-x3B2の分泌量はLPS群が最も多かった。しかし、TLR4、TGF-1、およびIL-6の発現には、TAK-242群と正常対照群との間に有意な差は認められなかった（>0.05）。また、RT-PCRにより、LPS群のIL-6 mRNA発現量が3群の中で最も高いことが示された(<0.01)。

RESULTS: Double immunofluorescent labeling in the extracted cells showed negative keratin staining and positive vimentin staining. Western blot showed that the LPS group had the highest expression of TLR4 and TGF-β1 (<0.01). Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) also showed that the secretion of IL-6 was the highest in LPS group (<0.01). But there was no significant difference in TLR4 and TGF-1, as well as IL-6 expressions between the TAK-242 group and the normal control group (>0.05). RT-PCR showed that the IL-6 mRNA expression in LPS group was the highest in the three groups (<0.01).

結論:

TAK-242は、TLR4シグナル伝達経路を制御することにより、LPS誘発性テノンカプセル線維芽細胞の増殖と炎症因子の放出を抑制し、緑内障濾過術後の濾過路の瘢痕化を抑制する新たなアイデアを提供するものである。

CONCLUSION: TAK-242 inhibits the proliferation of LPS-induced Tenon's capsule fibroblasts and the release of inflammatory factors by regulating the TLR4 signaling pathway, providing a new idea for reducing the scarring of the filter passage after glaucoma filtration surgery.

International Journal of Ophthalmology Press.