DNA損傷におけるカスパーゼ開始因子の高分子量活性化複合体の単離

Isolation of High-Molecular-Weight Activation Complexes of Initiator Caspases in DNA Damage.

• A V Zamaraev
• A Yu Egorshina
• I N Lavrik
• B D Zhivotovsky
• G S Kopeina

抄録

化学療法薬によるアポトーシスの開始は、がん治療の最も効果的なアプローチの一つである。アポトーシスの主要な酵素であるカスパーゼは、細胞死を開始するために活性化されます。カスパーゼの活性化には、特殊なタンパク質複合体との結合が必要である。アポトーシスのメカニズムを解明するためには、これらの複合体を単離する必要があります。しかし、これらの複合体は細胞内でごく微量に形成され、急速に分解されるため、その精製は困難である。私たちは、DNA損傷に応答して腫瘍細胞内で形成されるカスパーゼ活性化複合体を単離するための有効な方法を開発しました。この方法は、ゲルろ過と免疫沈降を組み合わせたものである。第1段階では、高分子量のカスパーゼ活性化複合体とその単量体の分離を目的としており、第2段階での複合体の単離効率を高めることができます。

Initiation of apoptosis by chemotherapeutic drugs is one of the most effective approaches to the treatment of cancers. Caspases, the main enzymes of apoptosis, undergo activation to initiate cell death. Activation of initiator caspases requires their binding to special protein complexes. For elucidation of the mechanisms of apoptosis, these complexes should be isolated. However, their purification is challenging because they are formed in the cell in negligible amounts and rapidly degrade. We have developed an effective way to isolate caspase activation complexes formed in tumor cells in response to DNA damage. The method is based on combination of gel filtration with immunoprecipitation. The first stage is aimed at the separation of the high-molecular-weight caspase activation complexes and their monomeric forms, which allows increasing the efficiency of isolation of complexes at the second stage.