合成オキシトシンペプチドに対するモノクローナル抗体がマウス視床下部神経細胞を染色する

A monoclonal antibody raised against a synthetic oxytocin peptide stains mouse hypothalamic neurones.

• Yuji Kogami
• Takahiro Tsuji
• Chiharu Tsuji
• Shigeru Yokoyama
• Kazumi Furuhara
• Olga Lopatina
• Anna Shabalova
• Alla B Salmina
• Yumi Watanabe
• Tsuyoshi Hattori
• Katsuhiko Nishimori
• Kota Kodama
• Haruhiro Higashida

抄録

合成オキシトシンペプチドを免疫したマウスの骨髄腫細胞および脾臓リンパ球由来の7a5ハイブリドーマ細胞にオキシトシンに対するモノクローナル抗体を作製した。7a5モノクローナル抗体は、酵素結合免疫吸着アッセイにおいてオキシトシンと結合した。7a5細胞増殖培地を5000倍まで希釈し、免疫組織化学に使用した。まず、7a5抗体のオキシトシンに対する特異性を調べるために、オキシトシン-ニューロフィシン遺伝子の最初のエクソンを欠失させたマウスのオキシトシンノックアウトマウスの脳組織を染色した。オキシトシンノックアウトマウスの視床下部の傍室核（PVN）には7a5免疫反応は認められなかったが、抗バソプレシンポリクローナル抗体HM07で強く染色されていた。野生型マウスPVNおよび視床上核（SON）の組織標本は、抗オキシトシンポリクローナル抗体HM06による染色と区別できない7a5免疫反応性を示した。PVNにおけるHM06の免疫反応性は、抗オキシトシンモノクローナル抗体PS38の免疫反応性に類似していた。次に、7a5とアルギニンバソプレシンとの交差反応性を調べた。7a5で染色された細胞のソーマおよびプロセスの大部分は、SON領域およびPVN領域においてバソプレシン抗体との共染色は認められなかった。さらに、視交叉上核はバソプレシン抗体で染色されたが、7a5では染色されなかった。これらの結果は、7a5がバソプレシンではなくオキシトシンを認識する新しい抗オキシトシンモノクローナル抗体であることを示しており、7a5は脳におけるオキシトシンの役割を調べるために使用できることを示している。

A monoclonal antibody against oxytocin was generated in 7a5 hybridoma cells derived from myeloma cells and lymphocytes from the spleen of mice immunised with a synthetic oxytocin peptide. The 7a5 monoclonal antibody bound with oxytocin in enzyme-linked immunosorbent assays. 7a5 cell growth medium was diluted up to 5000-fold and used for immunohistochemistry. First, to test the specificity of the 7a5 antibody against oxytocin, we stained brain tissues of oxytocin knockout mice, comprising mice in which the first exon of the oxytocin-neurophysin gene is deleted. No 7a5 immunoreactivity was detected in the paraventricular nucleus (PVN) of the hypothalamus of oxytocin knockout mice; however, this area was strongly stained with the anti-vasopressin polyclonal antibody, HM07. Tissue preparations of the wild-type mouse PVN and supraoptic nucleus (SON) displayed 7a5 immunoreactivity that was indistinguishable from the staining produced with an anti-oxytocin polyclonal antibody, HM06. The immunoreactivity of HM06 in the PVN was similar to that of an anti-oxytocin monoclonal antibody, PS38. We then examined the cross-reactivity of 7a5 with arginine vasopressin. The majority of cell soma and processes stained by 7a5 were not co-stained with the vasopressin antibody in SON and PVN regions. Furthermore, the suprachiasmatic nucleus was stained by the vasopressin antibody but not by 7a5. These results demonstrate that 7a5 is a new anti-oxytocin monoclonal antibody recognising oxytocin and not vasopressin; therefore, 7a5 can be used to investigate the role of oxytocin in the brain.

© 2019 British Society for Neuroendocrinology.