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ラット肝ミクロソームにおけるCYP2C11酵素が触媒する代謝反応生成物の同時定量のためのHPLC法の検証.サリチル酸のCYP2C11酵素に対するインビトロ阻害効果（英文
Validation of an HPLC Method for the Simultaneous Quantification of Metabolic Reaction Products Catalysed by CYP2C11 Enzymes in Rat Liver Microsomes: In Vitro Inhibitory Effect of Salicylic Acid on CYP2C11 Enzyme.
PMID: 31775347 PMCID: PMC6930622. DOI: 10.3390/molecules24234294.
抄録
ラット肝P450マーカー活性に対する新規化学物質の阻害効果を、創薬に向けた機能的アプローチで検討した。大腸がんの発症予防を中心に、サリチル酸を用いた大腸がんの治療や化学予防が注目されています。そこで、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）を用いて、ラットCYP2C11活性に対するサリチル酸のin vitro阻害効果を検討した。高速液体クロマトグラフィー分析は、32％リン酸緩衝液（pH3.36）と68％メタノールを移動相として用い、243nmの逆相Cカラム（SUPELCO 25cm×4.6mm×5μm）を用いて行った。CYP2C11アッセイは、すべての成分について良好な直線性を示した（R > 0.999）。基質および代謝物は72時間まで安定であることがわかりました。さらに、この方法は、良好な再現性、日内および日間精度（15%未満）、許容可能な回収率および精度（80%～120%）、16α-ヒドロキシテストステロンおよびテストステロンの低検出率（1.3501 µMおよび3.2757 µM）および定量限界値（4.914 µMおよび9.927 µM）を示しました。サリチル酸は、CYP2C11酵素活性に対して、K = 84.582 ± 2.67 µM（本来の酵素活性の50%阻害を引き起こす阻害剤濃度（IC） = 82.70 ± 2.67 µM）の非競合的（弱い）阻害剤として可逆的に作用した。このことは、毒性や薬物相互作用を引き起こす可能性が低いことを示している。
The inhibitory effect of new chemical entities on rat liver P450 marker activities was investigated in a functional approach towards drug development. Treatment of colorectal cancer (CRC) and chemoprevention using salicylic acid has gained a lot of attention, mainly in the prevention of the onset of colon cancer. Thus, an in vitro inhibitory effect of salicylic acid on rat CYP2C11 activity was examined by using high performance liquid chromatography (HPLC). High performance liquid chromatography analysis of a CYP2C11 assay was developed on a reversed phase C column (SUPELCO 25 cm × 4.6 mm × 5 µm) at 243 nm using 32% phosphate buffer (pH 3.36) and 68% methanol as a mobile phase. The CYP2C11 assay showed good linearity for all components (R > 0.999). Substrates and metabolites were found to be stable for up to 72 hours. Additionally, the method demonstrated good reproducibility, intra- and inter-day precision (<15%), acceptable recovery and accuracy (80%-120%), and low detection (1.3501 µM and 3.2757 µM) and quantitation limit values (4.914 µM and 9.927 µM) for 16α-hydroxytestosterone and testosterone, respectively. Salicylic acid acts reversibly as a noncompetitive (weak) inhibitor with K = 84.582 ± 2.67 µM (concentration of inhibitor to cause 50% inhibition of original enzyme activity (IC) = 82.70 ± 2.67 µM) for CYP2C11 enzyme activity. This indicates a low potential to cause toxicity and drug-drug interactions.