日本語AIでPubMedを検索
DHAは、ヒト脳血管周囲細胞のSSeCKSを活性化することにより、低酸素/再酸素化傷害を減衰させる
DHA Attenuates Hypoxia/Reoxygenation Injury by Activating SSeCKS in Human Cerebrovascular Pericytes.
PMID: 31776970 PMCID: PMC6985071. DOI: 10.1007/s11064-019-02915-0.
抄録
ドコサヘキサエン酸（DHA）は、血液脳関門透過性を低下させ、Ang-1/Ang-2比を増加させることで、脳虚血・再灌流障害を緩和することができるが、その機序は不明である。プロテインキナーゼCの基質であるSrc-suppressed C kinase substrates（SSeCKS）は、細胞結合や細胞形態の維持、細胞透過性の調節に重要な役割を果たしている。しかし、DHAがSSeCKSの発現を増加させ、その後Ang-1/Ang-2比を媒介するかどうかについては、まだ研究が必要である。インビトロで培養したヒト脳血管周囲細胞（HBVP）をグループに分け、SSeCKS発現をノックダウンするSSeCKS siRNAと一緒にDHAの有無にかかわらず処理し、その後、再酸素化の6hに続く低酸素の24hにさらされた。細胞生存率、乳酸脱水素酵素（LDH）遊離、およびAng-1、Ang-2およびVEGF活性をELISAキットを用いて検出した。アポトーシス率はTUNELフローサイトメトリーにより評価した。SSeCKS、Ang-1、Ang-2およびVEGFタンパク質の発現は、ウエスタンブロットにより評価した。10μMまたは40μMのDHAを用いた前処理は、SSeCKSを活性化してHBVPsのAng-1/Ang-2比を増加させ、VEGF発現をダウンレギュレートさせることで、低酸素/再酸素化（H/R）傷害を効率的に減衰させ、LDH遊離とアポトーシス率の低下とHBVPsの生存率の増加によって証明された。一方、SSeCKS siRNAを用いてSSeCKSタンパク質発現をノックダウンしたところ、H/R傷害後のHBVPsに対するDHAの保護効果が逆転した。結論として、DHAはSSeCKSを活性化してHBVPsのAng-1/Ang-2比を増加させ、VEGF発現をダウンレギュレートすることで、H/R傷害を軽減することができる。
Docosahexaenoic acid (DHA) can alleviate cerebral ischemia/reperfusion injury by reducing blood-brain barrier permeability and maintaining its integrity, accompanied by an increased Ang-1/Ang-2 ratio; however, the underlying mechanisms of these effects remain unclear. Src-suppressed C kinase substrates (SSeCKS), a substrate of protein kinase C, plays an important role in maintaining cell junctions and cell morphology and regulating cell permeability. However, whether DHA can increase SSeCKS expression and then mediate the Ang-1/Ang-2 ratio still needs to be studied. Human cerebrovascular pericytes (HBVPs) cultured in vitro were divided into groups, treated with or without DHA along with SSeCKS siRNA to knockdown SSeCKS expression, and then subjected to 24 h of hypoxia followed by 6 h of reoxygenation. Cell viability; lactate dehydrogenase (LDH) release; and Ang-1, Ang-2 and VEGF activity were detected by using ELISA kits. The apoptosis rate was assessed by TUNEL flow cytometry. Expression of the SSeCKS, Ang-1, Ang-2 and VEGF proteins was evaluated by western blotting. Pretreatment with 10 μM or 40 μM DHA efficiently attenuated hypoxia/reoxygenation (H/R) injury by activating SSeCKS to increase the Ang-1/Ang-2 ratio and downregulate VEGF expression in HBVPs, as evidenced by decreased LDH release and apoptotic rates and increased HBVPs viability. Meanwhile, after we used SSeCKS siRNA to knock down SSeCKS protein expression, the protective effect of DHA on HBVPs following H/R injury was reversed. In conclusion, DHA can activate SSeCKS to increase the Ang-1/Ang-2 ratio and downregulate VEGF expression in HBVPs, thus reducing H/R injury.