ジアルジア・デュオデナリスにおけるTRBD亜鉛フィンガー相互作用タンパク質の同定とテロメラーゼの制御機構の解明

Identification of a TRBD zinc finger-interacting protein in Giardia duodenalis and its regulation of telomerase.

• Jing-Tong Zheng
• Nan Zhang
• Yan-Hui Yu
• Peng-Tao Gong
• Xian-He Li
• Na Wu
• Can Wang
• Xiao-Cen Wang
• Xin Li
• Jian-Hua Li
• Xi-Chen Zhang

抄録

背景:

ジアルジア・デュオデナリスは下痢を主症状とするジアルジア症を引き起こす．この人獣共通感染性寄生虫のトロポゾライト増殖はテロメラーゼの影響を受けているが，テロメラーゼの制御機構は十分に解析されていない．

BACKGROUND: Giardia duodenalis causes giardiasis, with diarrhea as the primary symptom. The trophozoite proliferation of this zoonotic parasite is mainly affected by telomerase, although the mechanism of telomerase regulation has not been thoroughly analyzed.

方法:

本研究では、G. duodenalis のテロメラーゼ RNA 結合ドメイン（TRBD）と相互作用するタンパク質を同定し、テロメラーゼを制御することを目的とした。TRBDと相互作用するタンパク質との相互作用をプルダウンアッセイとco-IP（co-immunoprecipitation）技術を用いて検証し、タンパク質相互作用の細胞内局在をスプリットSNAP-tag標識法を用いて生体内で決定した。ハンマーヘッドリボザイムは、TRBDと相互作用するタンパク質のmRNAを枯渇させるように設計されていた。

METHODS: This study was performed to identify the telomerase RNA-binding domain (TRBD)-interacting protein in G. duodenalis and its regulation of telomerase. Interaction between TRBD and interacting proteins was verified via pulldown assays and co-immunoprecipitation (co-IP) techniques, and the subcellular localization of the protein interactions was determined in vivo via split SNAP-tag labeling. The hammerhead ribozyme was designed to deplete the mRNA of TRBD-interacting proteins.

結果:

TRBDを餌としてジンクフィンガードメイン(ZFD)を含むタンパク質を同定し、プルダウン実験とco-IP実験により検証した。293T細胞の核とG. duodenalisの核の両方でタンパク質間の相互作用が起こった。ハンマーヘッドリボザイムはZFDのmRNAレベルを枯渇させ、G. duodenalisの生殖率、テロメラーゼ活性、テロメア長を減少させた。

RESULTS: Using TRBD as bait, we identified zinc-finger domain (ZFD)-containing proteins and verified it via pulldown and co-IP experiments. Protein-protein interaction occurred in the nuclei of 293T cells and both nuclei of G. duodenalis. The hammerhead ribozyme depleted ZFD mRNA levels, which reduced the reproduction rate of G. duodenalis, telomerase activity and telomere length.

結論:

私たちの知見は、ZFDがG. duodenalisの核におけるテロメア機能を制御している可能性を示唆しています。

CONCLUSIONS: Our findings suggest that ZFD may regulate telomere function in G. duodenalis nuclei.