2種のグリプチンとその主な合成不純物のin vitro毒性評価

In vitro toxic evaluation of two gliptins and their main impurities of synthesis.

• Camila F A Giordani
• Sarah Campanharo
• Nathalie R Wingert
• Lívia M Bueno
• Joanna W Manoel
• Barbara Costa
• Shanda Cattani
• Marcelo Dutra Arbo
• Solange Cristina Garcia
• Cássia Virginia Garcia
• Nádia Maria Volpato
• Elfrides Eva Scherman Schapoval
• Martin Steppe

抄録

背景:

薬剤の中には不純物が存在すると、患者の治療の安全性や有効性を損なう可能性がある。したがって、不純物の生物学的安全性を確立することが不可欠である。糖尿病患者は酸化ストレスプロセスの増加により組織損傷を受けやすく、薬物の不純物はこれらの毒性効果に寄与する可能性があります。そこで、本研究の目的は、抗糖尿病薬であるシタグリプチン、ビルダグリプチン、およびそれらの2つの主要な合成不純物（それぞれS1およびS2；V1およびV2）の3T3細胞における毒性を研究することであった。

BACKGROUND: The presence of impurities in some drugs may compromise the safety and efficacy of the patient's treatment. Therefore, establishing of the biological safety of the impurities is essential. Diabetic patients are predisposed to tissue damage due to an increased oxidative stress process; and drug impurities may contribute to these toxic effects. In this context, the aim of this work was to study the toxicity, in 3 T3 cells, of the antidiabetic agents sitagliptin, vildagliptin, and their two main impurities of synthesis (S1 and S2; V1 and V2, respectively).

方法:

細胞毒性試験では、MTT還元アッセイ、中性赤取り込みアッセイを行った。さらに、ＤＮＡ損傷（コメットアッセイで測定）、細胞内フリーラジカル（ＤＣＦで測定）、ＮＯ産生、ミトコンドリア膜電位（ΔψＭ）を評価した。

METHODS: MTT reduction and neutral red uptake assays were performed in cytotoxicity tests. In addition, DNA damage (measured by comet assay), intracellular free radicals (by DCF), NO production, and mitochondrial membrane potential (ΔψM) were evaluated.

結果:

不純物V2では細胞毒性が認められた。フリーラジカルの発生は、シタグリプチンの1000μMおよび両不純物（V1およびV2）の10μMで認められた。全てのビルダグリプチン濃度でNO産生の減少が観察されました。試験した濃度では、ΔψMやDNA損傷の変化は観察されませんでした。

RESULTS: Cytotoxicity was observed for impurity V2. Free radicals generation was found at 1000 μM of sitagliptin and 10 μM of both vildagliptin impurities (V1 and V2). A decrease in NO production was observed for all vildagliptin concentrations. No alterations were observed in ΔψM or DNA damage at the tested concentrations.

結論:

本研究では、不純物の存在が製剤の細胞毒性や酸化ストレスを増加させる可能性があることを明らかにした。

CONCLUSIONS: This study demonstrated that the presence of impurities might increase the cytotoxicity and oxidative stress of the pharmaceutical formulations at the concentrations studied.