EBVマイクロRNA-BHRF1-2-5pは、免疫チェックポイントリガンドPD-L1とPD-L2の3'UTRを標的としている

EBV microRNA-BHRF1-2-5p targets the 3'UTR of immune checkpoint ligands PD-L1 and PD-L2.

• Alexandre S Cristino
• Jamie Nourse
• Rachael A West
• Muhammed Bilal Sabdia
• Soi C Law
• Jay Gunawardana
• Frank Vari
• Sally Mujaj
• Gayathri Thillaiyampalam
• Cameron Snell
• Madeline Gough
• Colm Keane
• Maher K Gandhi

抄録

エプスタインバーウイルス陽性（EBV+）びまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL）は、プログラムされた死のリガンド1（PD-L1）とPD-L2を高レベルで発現している。マイクロRNA（miR）制御は、3'-非翻訳領域（3'UTR）ターゲティングを介した遺伝子発現の微調整のための重要なメカニズムであり、我々は以前にEBV+ DLBCLにおいて強いEBV miR発現を実証している。EBV latent membrane protein-1 (LMP1)はPD-L1/L2を誘導することが知られているが、PD-L1/L2発現の微調整におけるEBV miRの潜在的なカウンターレギュレーター的役割はまだ確立されていない。これを調べるために、一般的な実験室用株とは異なり、いくつかのEBV miRが存在するノンコーディング領域を無傷で保持しているウイルス株EBV WILを用いて、EBV+ DLBCLの新規in vitroモデルを開発した。これにより、EBV潜伏遺伝子、細胞起源（COO）、PD-L1、PD-L2、EBV miRsの関係を調べることが可能となった。このモデルは、4つの離散的なCOOフェーズ（初期・後期生殖中心B細胞（GCB）と初期・後期活性化B細胞（ABC））を持つB細胞分化の全スペクトルを再現することに成功した。興味深いことに、PD-L1/L2レベルは、LMP1のアップレギュレーションの後、後期GCB期から初期ABC期への移行期に顕著に増加した。EBV miR-BamHIフラグメントH右回りオープンリーディングフレーム1 (BHRF1)-2-5pは、他のEBV miRとは異なりクラスター化しており、後期GCB期に上昇していた。EBV miR-BHRF1-2-5pはPD-L1およびPD-L2 3'UTRに結合し、PD-L1/L2表面タンパク質の発現を低下させることがバイオインフォマティクス的に予測された。この結果は、EBV miR-BHRF1-2-5pが文脈に依存したカウンターレギュレーター的な役割を果たし、これらの抑制性チェックポイントリガンドのLMP1駆動増幅の発現を微調整するという新しいメカニズムを示唆している。免疫チェックポイントを標的とするmiRのさらなる同定により、新規のRNAベースの治療法が出現する可能性がある。

Epstein-Barr virus-positive (EBV+) diffuse large B-cell lymphomas (DLBCLs) express high levels of programmed death ligand 1 (PD-L1) and PD-L2. MicroRNA (miR) regulation is an important mechanism for the fine-tuning of gene expression via 3'-untranslated region (3'UTR) targeting, and we have previously demonstrated strong EBV miR expression in EBV+ DLBCL. Whereas the EBV latent membrane protein-1 (LMP1) is known to induce PD-L1/L2, a potential counterregulatory role of EBV miR in the fine-tuning of PD-L1/L2 expression remains to be established. To examine this, a novel in vitro model of EBV+ DLBCL was developed, using the viral strain EBV WIL, which unlike common laboratory strains retains intact noncoding regions where several EBV miRs reside. This enabled interrogation of the relationship among EBV latency genes, cell of origin (COO), PD-L1, PD-L2, and EBV miRs. The model successfully recapitulated the full spectrum of B-cell differentiation, with 4 discrete COO phases: early and late germinal center B cells (GCBs) and early and late activated B cells (ABCs). Interestingly, PD-L1/L2 levels increased markedly during transition from late GCB to early ABC phase, after LMP1 upregulation. EBV miR-BamHI fragment H rightward open reading frame 1 (BHRF1)-2-5p clustered apart from other EBV miRs, rising during late GCB phase. Bioinformatic prediction, together with functional validation, confirmed EBV miR-BHRF1-2-5p bound to PD-L1 and PD-L2 3'UTRs to reduce PD-L1/L2 surface protein expression. Results indicate a novel mechanism by which EBV miR-BHRF1-2-5p plays a context-dependent counterregulatory role to fine-tune the expression of the LMP1-driven amplification of these inhibitory checkpoint ligands. Further identification of immune checkpoint-targeting miRs may enable potential novel RNA-based therapies to emerge.

© 2019 by The American Society of Hematology.