歯内シーラーで処理した歯根膜線維芽細胞の細胞毒性、細胞接着、アポトーシス遺伝子発現

Cytotoxicity, Cell Adhesion, and Apoptotic Gene Expression in Periodontal Ligament Fibroblasts treated with Endodontic Sealers.

• Diana María Escobar-García
• Nathalie Escobedo-Márquez
• Verónica Méndez-González
• Ana María González-Amaro
• Héctor Flores-Reyes
• Amaury Pozos-Guillén

抄録

目的:

本研究では、2種類の歯内シーラーで処理した歯根膜線維芽細胞（PLF）における細胞毒性、細胞接着、アポトーシス遺伝子発現を評価した。

OBJECTIVE: The present study assessed cytotoxicity, cell adhesion, and apoptotic gene expression in periodontal ligament fibroblasts (PLF) treated with 2 endodontic sealers.

方法:

PLF細胞は、非破裂した第三大臼歯から得られ、培養された。MTSおよびLIVE/DEADアッセイを、異なる処置および時間帯を用いて実施した。細胞接着性は、インテグリンβ1およびヴィンキュリンの発現について免疫細胞化学を用いて評価し、核内因子kB（NF-кB）、P53およびアポトーシスプロテアーゼ活性化因子1（Apaf-1）の遺伝子発現についてPCRを用いて評価した。

METHODS: PLF cells were obtained from nonerupted third molars and cultured. MTS and LIVE/DEAD assays were performed using different treatments and time periods. Cellular adhesion was evaluated using immunocytochemistry for integrin β1 and vinculin expression, and the gene expressions of nuclear factor kB (NF-кB), P53, and apoptotic protease-activating factor 1 (Apaf-1) were evaluated using PCR.

結果:

12、24、48時間後の細胞増殖は、対照群とPLF群で統計的に有意であった；非硬化（NH）シーラーを含む培地で処理したPLFでは細胞数の減少が認められた。また、硬化(H)シーラーを含む培地で処理したPLFは、細胞数の減少を示した。インテグリンβ１およびビンクリンは、アクロシール（ＮＨおよびＨ）で処理した両細胞培養物において発現していたが、細胞形態が変化し、細胞集団が減少していた。また、NF-kBおよびP53の遺伝子発現は、対照群と異なるシーラーで処理した群で有意に異なっており、ミネラルトリオキサイドアグリゲート（MTA）はApaf-1を阻害し、アクロシールHで処理したPLFはApaf-1の発現を増加させた。

RESULTS: Cell proliferation at 12, 24, and 48 h was statistically significant in the control and PLF groups receiving different treatments; PLF treated with culture medium containing non-hardened (NH) sealers showed a decrease in the number of cells. PLF treated with culture medium containing hardened (H) sealers also exhibited a decreased cell population. Integrin β1 and vinculin were expressed in both cell cultures treated with Acroseal (NH and H); however, the cell morphology changed and the cell population decreased. The gene expression of NF-kB and that of P53 were significantly different between the control group and the groups treated with the different sealers; mineral trioxide aggregate (MTA) (NH and H) inhibited Apaf-1, and PLF treated with Acroseal H exhibited increased Apaf-1 expression.

結論:

いずれのシーラーも一定の細胞毒性を示した。また、シーラーで処理したPLFのNF-κBおよびP53の遺伝子発現は対照群と比較して有意な変化を示し、MTAはApaf-1を阻害した。

CONCLUSION: Both sealers showed a certain level of cytotoxicity. The gene expression of NF-κB and P53 in PLF treated with the sealers showed significant changes compared to that of the control group, and MTA inhibited Apaf-1.