LncRNA NNT-AS1 は NNT-AS1/miR-3666/E2F2 軸を介して肺がんの進行を制御している

LncRNA NNT-AS1 regulates the progression of lung cancer through the NNT-AS1/miR-3666/E2F2 axis.

• J-W Huang
• X-Y Luo
• Z-H Li
• B-P Lang

抄録

目的:

肺がんは、死亡率が高く、予後不良であることから、人間の健康に大きな負担をかけている。癌の発生には長鎖非コードRNA（lncRNA）が関与していることが広く注目されています。本研究では、肺がんの進行におけるlncRNAニコチンアミドヌクレオチドトランシドゲナーゼアンチセンスRNA1（NNT-AS1）の役割と新規メカニズムを明らかにすることを目的とした。

OBJECTIVE: Lung cancer is the main burden on human health, with high mortality and poor prognosis. The involvement of long non-coding RNAs (lncRNAs) in the development of cancer has attracted wide attention. This study aimed to investigate the role and novel mechanisms of lncRNA nicotinamide nucleotide transhydrogenase antisense RNA 1 (NNT-AS1) in the progression of lung cancer.

材料と方法:

定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）を行い、NNT-AS1、microRNA-3666（miR-3666）、E2F転写因子2（E2F2）の発現を検出した。細胞増殖の解析には、３-（４，５-ジメチル-２-チアゾリル）-２，５-ジフェニル-２-Ｈ-テトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）アッセイを用いた。細胞のアポトーシスを調べるためにフローサイトメトリーを行った。細胞の浸潤を観察するためにトランスウェルアッセイを実施した。miR-3666とNNT-AS1またはE2F2との相互作用をバイオインフォマティクスツールstarBase v2.0で予測し、Dual-Luciferaseレポーターアッセイで検証した。E2F2のタンパク質レベルはウェスタンブロットにより定量した。

MATERIALS AND METHODS: Quantitative Real Time-Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR) was performed to detect the expression of NNT-AS1, microRNA-3666 (miR-3666), and E2F transcription factor 2 (E2F2). 3-(4, 5-dimethyl-2-thiazolyl)-2, 5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide (MTT) assay was used to analyze cell proliferation. Flow cytometry was carried out to investigate cell apoptosis. Transwell assay was conducted to observe cell invasion. The interaction between miR-3666 and NNT-AS1 or E2F2 was predicted by bioinformatics tool starBase v2.0 and verified by Dual-Luciferase reporter assay. The protein level of E2F2 was quantified by Western blot.

結果:

NNT-AS1とE2F2はアップレギュレーションされていたが、miR-3666はダウンレギュレーションされていた。NNT-AS1 のノックダウンは肺がん細胞の増殖と浸潤を抑制したが、アポトーシスを亢進させ、miR-3666 の阻害はこれらの効果を逆転させた。miR-3666はNNT-AS1の標的であり、E2F2と直接相互作用することが確認された。miR-3666の濃縮に起因する肺癌細胞の増殖・浸潤抑制、アポトーシス促進作用は、E2F2の過剰発現によって覆された。さらに、E2F2はmiR-3666を介してNNT-AS1によって制御されていた。

RESULTS: NNT-AS1 and E2F2 were upregulated, but miR-3666 was downregulated in lung cancer tissues and cells. NNT-AS1 knockdown attenuated proliferation and invasion but enhanced apoptosis of lung cancer cells, while miR-3666 inhibition reversed these effects. It was confirmed that miR-3666 was a target of NNT-AS1 and it directly interacted with E2F2. The inhibitory proliferation and invasion, and acceleratory apoptosis of lung cancer cells, caused by miR-3666 enrichment, were overturned by E2F2 overexpression. Furthermore, E2F2 was regulated by NNT-AS1 through miR-3666.

結論:

NNT-AS1 は NNT-AS1/miR-3666/E2F2 制御軸を介して肺癌の進行に少なくとも一部関与していた。本研究は、肺がん治療のための有望な戦略を提供するものであった。

CONCLUSIONS: NNT-AS1 participated in the progression of lung cancer through NNT-AS1/miR-3666/E2F2 regulatory axis at least in part. Our study supplied a promising strategy for the treatment of lung cancer.