BAFFは、糸球体メサンギウム細胞におけるTRAF6/NF-κBシグナル伝達経路を活性化することにより、IgA腎症の発症に関与している

BAFF is involved in the pathogenesis of IgA nephropathy by activating the TRAF6/NF‑κB signaling pathway in glomerular mesangial cells.

抄録

本研究の目的は、糸球体メサンギウム細胞における腫瘍壊死因子受容体関連因子6（TRAF6）／NF-κBシグナル伝達経路を活性化することにより、IgA腎症の病態にB細胞活性化因子（BAFF）が関与していることを検討することである。臨床分析では、腎生検により原発性IgA腎症と診断された58名の患者から血液、尿および腎組織を採取した。試験管内研究では、糸球体メサンギウム細胞を5つのグループに分けた：コントロール（con）-ショートヘアピンRNA（shRNA）（コントロール群）；con-shRNA＋BAFF（20ng/ml）；con-shRNA＋BAFF＋BAFF-RFcキメラタンパク質（500μg/ml）；TRAF6-shRNA；およびTRAF6-shRNA＋BAFF（20ng/ml）。invivo実験では、60匹のSprague-Dawleyラットを無作為に4群に分けた：con-小干渉RNA（siRNA）（対照群）、con-siRNA＋IgA（IgA腎症群）、BAFF-RFcキメラタンパク質（2μg/ml）＋IgA、およびTRAF6-siRNA（0.2μM）＋IgAである。逆転写-定量的PCRを行い、TRAF6、結合組織成長因子（CTGF）、フィブロネクチン（FN）、NF-κBP65のmRNA発現レベルを評価した。ウェスタンブロット分析により、糸球体メサンギウム細胞および腎臓組織におけるTRAF6、FN、CTGFおよびリン酸化-NF-κBP65のタンパク質発現レベルを検出した。その結果、血漿中のBAFF濃度は、IgA腎症患者の病理学的損傷の重症度と正の相関があることが明らかになった。インビトロで、BAFFは糸球体メサンギウム細胞においてTRAF6、CTGF、FNおよびNF-κBP65のmRNAおよびタンパク質発現を誘導した。BAFF-RFcキメラタンパク質を添加してBAFFとBAFF-受容体（-R）の結合を阻害すると、この作用は減少した。インビボでは、BAFF-R Fcキメラタンパク質を注射してBAFFの作用を抑制すると、IgA腎症ラットの腎障害が軽減した。シグナル伝達経路関連タンパク質の発現に対する影響も緩和された。結論として、BAFFはTRAF6/NF-κBシグナル伝達経路を活性化することにより、腎臓における線維芽細胞因子の発現を増強した。

The aim of the present study was to investigate the involvement of B cell‑activating factor (BAFF) in the pathogenesis of IgA nephropathy by activating the tumor necrosis factor receptor‑associated factor 6 (TRAF6)/NF‑κB signaling pathway in glomerular mesangial cells. For the clinical analysis, blood, urine and kidney tissue samples were collected from 58 patients diagnosed with primary IgA nephropathy by renal biopsy. For the in vitro study, glomerular mesangial cells were divided into five groups: Control (con)‑short hairpin RNA (shRNA) (control group); con‑shRNA + BAFF (20 ng/ml); con‑shRNA + BAFF + BAFF‑RFc chimera protein (500 µg/ml); TRAF6‑shRNA; and TRAF6‑shRNA + BAFF (20 ng/ml). For the in vivo experiments, 60 Sprague‑Dawley rats were randomly divided into four groups: Con‑small interfering RNA (siRNA) (control group); con‑siRNA + IgA (IgA nephropathy group), BAFF‑RFc chimera protein (2 µg/ml) + IgA, and TRAF6‑siRNA (0.2 µM) + IgA. Reverse transcription‑quantitative PCR was performed to evaluate the mRNA expression levels of TRAF6, connective tissue growth factor (CTGF), fibronectin (FN) and NF‑κBP65. Western blot analysis was used to detect the protein expression levels of TRAF6, FN, CTGF and phosphorylated‑NF‑κBP65 in glomerular mesangial cells and kidney tissues. The results revealed that plasma BAFF levels were positively correlated with the severity of pathological damage in patients with IgA nephropathy. In vitro, BAFF induced the mRNA and protein expression of TRAF6, CTGF, FN and NF‑κBP65 in glomerular mesangial cells. After the BAFF‑RFc chimera protein was added to inhibit the binding of BAFF and BAFF‑receptor (‑R), this effect was reduced. In vivo, inhibition of the effects of BAFF via injection with the BAFF‑R Fc chimera protein reduced kidney damage in rats suffering from IgA nephropathy. The effect on the expression of signaling pathway‑associated proteins was also alleviated. In conclusion, BAFF enhanced the expression of fibroblast factors in the kidneys by activating the TRAF6/NF‑κB signaling pathway.