純粋な血小板濃厚血漿の品質と力価に対する抗凝固剤の効果の比較研究

A Comparative Study of The Effects of Anticoagulants on Pure Platelet-Rich Plasma Quality and Potency.

抄録

再生医療のための多血小板血漿（PRP）の調製には、クエン酸塩または酸-シトレート-デキストロースのAフォーム（ACD-A）が適していると一般的に言われています。しかし、これは輸血からのエビデンスに基づいており、再生医療からのエビデンスではありません。そこで、このギャップを解消するために、ACD-A、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ヘパリンなどの抗凝固剤がPRPの再生品質に及ぼす影響を検討した。血液サンプルは抗凝固剤の存在下で採取され、純粋なPRPを調製するために処理されました。血小板サイズ，活性化状態，および血小板内遊離Ca濃度は，血球計数装置とフローサイトメーターを用いて測定した。血小板由来成長因子-BB（PDGF-BB）はELISA法で定量した。純血小板サンプルでは，EDTAが血小板の膨潤と活性化を引き起こしたが，最も多くの血小板を得ることができた。ヘパリンは、血小板を凝集させ、血球の計数を乱した。しかし，試験した抗凝固剤の間でPDGF-BB濃度に有意な差は認められなかった。さらに，高度なピペッティング技術を必要とせず，容易に血小板懸濁液を調製できることを考慮すると，これらの知見はEDTA由来の純粋なPRPが組織再生において同等の効力を持つことを示唆しており，純粋なPRPの調製にEDTAを使用することを支持するものである。しかし，純粋なPRPにEDTAを配合することによる悪影響を排除するためには，動物モデルを用いたさらなるin vivo試験が必要である。

It is generally accepted that citrate or the A-form of acid-citrate-dextrose (ACD-A) are suitable for preparing platelet-rich plasma (PRP) for regenerative therapy. However, this is based on evidence from blood transfusions and not from regenerative medicine. Thus, we examined the effects of anticoagulants, such as ACD-A, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), and heparin, on the regenerative quality of PRP to address this gap. The blood samples were collected in the presence of anticoagulants and were processed to prepare pure-PRP. Platelet size, activation status, and intra-platelet free Ca concentration were determined while using a hematology analyzer and flow cytometer. Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) was quantified while using an ELISA. In pure-PRP samples, EDTA caused platelet swelling and activation, but yielded the highest number of platelets. Heparin aggregated platelets and disturbed the overall counting of blood cells. However, no significant differences in PDGF-BB levels were observed among the anticoagulants tested. Moreover, when considering the easy preparation of platelet suspensions, without the need for high-level pipetting skills, these findings suggest the comparable potency of EDTA-derived pure-PRP in tissue regeneration and support the use of EDTA in the preparation of pure-PRP. Further in vivo studies are required in animal models to exclude the possible negative effects of including EDTA in pure-PRP preparations.