DOCK10.1タンパク質の発現を特異的抗血清を用いて明らかにした：DOCK10の第一エキソンアイソフォームの制御についての洞察

Expression of DOCK10.1 protein revealed with a specific antiserum: insights into regulation of first exon isoforms of DOCK10.

• Antonio Parrado

抄録

Rho GTPaseのグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）であるDOCK10は、DOCK10.1とDOCK10.2と名付けられた代替的な第一エクソンmRNAアイソフォームを生み出す遺伝子の一例である。ヒトDOCK10.2タンパク質の細胞株での発現、および正常Bリンパ球や慢性リンパ性白血病（CLL）細胞でのインターロイキン-4（IL-4）による誘導は、以前にエクソン1.2からの配列をコードするペプチドに対する抗血清を用いて実証されています。ここでは、エクソン1.1からの配列でコードされるペプチドに対する抗血清を用いて、ヒトDOCK10.1タンパク質の発現を実証しました。DOCK10.1およびDOCK10.2抗血清のそれぞれのアイソフォームに対する特異性は、トランスフェクトしたヒト293T細胞を用いて実証された。内因性DOCK10に対する特異性は、250kDaの分子サイズで期待されるシグナルレベルとDOCK10.1およびDOCK10.2のmRNAレベルとの間に高い相関関係があることから強く示唆された。また、マウスを用いたDOCK10ノックアウトモデルを用いて、DOCK10に対するDOCK10.1抗血清の特異性を実証した。このことから、IL-4がDOCK10を制御するメカニズムはアイソフォーム特異的ではないことが明らかになった。最後に、DOCK10アイソフォームの差異的な制御機構を明らかにするために、細胞株におけるDOCK10アイソフォームのタンパク質レベルを、Cancer Cell Line Encyclopedia (CCLE)から検索した遺伝子発現プロファイルと比較したところ、BCL3とKLF12がそれぞれDOCK10.1とDOCK10.2の転写制御因子であることが明らかになった。

DOCK10, a guanine-nucleotide exchange factor (GEF) for Rho GTPases, represents the example of a gene that gives rise to alternative first exon mRNA isoforms, named DOCK10.1 and DOCK10.2. Expression of human DOCK10.2 protein in cell lines, and its induction by interleukin-4 (IL-4) in normal B lymphocytes and chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells, were previously demonstrated using an antiserum raised against a peptide encoded by sequences from exon 1.2. Here, expression of human DOCK10.1 protein was demonstrated using an antiserum raised against a peptide encoded by sequences from exon 1.1. Specificity of the DOCK10.1 and DOCK10.2 antisera for their respective isoforms was demonstrated using transfected human 293 T cells. Their specificity for endogenous DOCK10 was strongly suggested by the high significance of the correlations between the levels of their expected signals at the molecular size of 250 kDa and the levels of DOCK10.1 and DOCK10.2 mRNAs, respectively, in human hematopoietic cell lines. Specificity of the DOCK10.1 antiserum for DOCK10 was also demostrated in mouse using the DOCK10 knockout model. The DOCK10.1 protein was induced by IL-4 in CLL cells, which demonstrates that the mechanism by which IL-4 regulates DOCK10 is not isoform-specific. Last, to get insights into differential regulation of the DOCK10 isoforms, their protein levels in cell lines were compared with their gene expression profiles retrieved from the Cancer Cell Line Encyclopedia (CCLE), leading to the identification of BCL3 and KLF12 as potential transcriptional regulators of DOCK10.1 and DOCK10.2, respectively.