ビス特異的抗体を増幅するための哺乳類ＩＲＥＳベースの発現ベクターの構築；Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ．

Construction of a Mammalian IRES-based Expression Vector to Amplify a Bispecific Antibody; Blinatumomab.

• Fatemeh Naddafi
• Fatemeh Davami
• Maryam Tabarzad
• Farzaneh Barkhordari
• Farshad H Shirazi

抄録

bispecificT cellengager抗体（BsAb）であるBlinatumomabは、これまでで最も成功したBsAbとして実証されてきた。過去10年間を通して、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞におけるモノクローナル抗体の発現には、ベクターデザインが非常に重要になってきました。伸長因子-１α（ＥＦ-１α）遺伝子とＤＨＦＲ選択マーカーに基づく発現ベクターは、選択培地中で安定にトランスフェクトされた細胞の集団を産生するのに非常に有効であることが示されてきた。さらに、phiC31インテグラーゼ系は、哺乳類細胞における魅力的で安全なタンパク質発現系と考えられており、任意のサイズのドナープラスミドをシングルコピーとして、補因子なしで宿主ゲノムに統合することが可能である。本研究では、phiC31 インテグラーゼ技術と DHFR 増幅システムを組み合わせて、CHO 細胞でのブリナツモマブの将来の発現のための発現ベクターを作製した。関心のある遺伝子（BsAb遺伝子）は、内部リボソームエントリーサイト（IRES）を挿入してDHFR選択マーカーに結合させることができた。DHFRをBsAb遺伝子とIRESの下流に配置することで、選択マーカーの転写は、発現コンストラクトの中で上流に位置していたBsAb遺伝子の転写が成功しているかどうかに依存することができる。本研究では、FC550A-1ベクターをバックボーンとして使用し、DHFR選択マーカーをphiC31インテグラーゼ技術と組み合わせることに成功し、今後の研究でCHO-DG44細胞におけるBsAb発現のための高発現コンストラクトを生成することができた。

Blinatumomab, the bispecific T cell engager antibody (BsAb), has been demonstrated as the most successful BsAb to date. Throughout the past decade, vector design has great importance for the expression of monoclonal antibody in Chinese hamster ovary (CHO) cells. It has been indicated that expression vectors based on the elongation factor-1 alpha (EF-1 alpha) gene and DHFR selection marker can be highly effective to produce populations of stably transfected cells in the selection medium. Moreover, the phiC31 integrase system is considered as an attractive and safe protein expression system in mammalian cells and it could integrate a donor plasmid of any size, as a single copy, in to the host genome with no cofactors. In this study, phiC31 integrase technology in combination with DHFR amplification system was used to have an expression vector for future expression of blinatumomab in CHO cells. The gene of interest (BsAb gene) could be joined to DHFR selection marker with the insertion of an internal ribosome entry site (IRES). By positioning the DHFR downstream of BsAb gene and IRES, the transcription of the selection marker can depend on the successful transcription of the BsAb gene, which was located upstream in the expression construct. In this study, FC550A-1 vector was used as the backbone and DHFR selection marker was successfully combined with phiC31 integrase technology to generate a high-expressing construct for BsAb expression in CHO-DG44 cells in future studies.