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SARS-CoV-2感染時の口腔咽頭唾液中のウイルス量と血清抗体反応の時間的プロファイル：観察的コホート研究
Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study.
PMID: 32213337 PMCID: PMC7158907. DOI: 10.1016/S1473-3099(20)30196-1.
抄録
バックグラウン:
コロナウイルス感染症2019（COVID-19）は、重篤な市中および院内のアウトブレイクを引き起こす。重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2（SARS-CoV-2）に感染した患者の連続呼吸器ウイルス量と血清抗体反応の包括的データはまだ得られていない。呼吸器感染症のウイルス負荷量を連続的に測定するためには，通常，鼻咽頭ぬぐい液や咽頭ぬぐい液を採取するが，これらの検体を採取することは，患者に不快感を与え，医療従事者を危険にさらす可能性がある．我々は，COVID-19患者の後咽頭（喉の奥）の唾液検体におけるSARS-CoV-2の連続的な呼吸器系ウイルス量と，血清抗体反応を確認することを目的とした．
BACKGROUND: Coronavirus disease 2019 (COVID-19) causes severe community and nosocomial outbreaks. Comprehensive data for serial respiratory viral load and serum antibody responses from patients infected with severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) are not yet available. Nasopharyngeal and throat swabs are usually obtained for serial viral load monitoring of respiratory infections but gathering these specimens can cause discomfort for patients and put health-care workers at risk. We aimed to ascertain the serial respiratory viral load of SARS-CoV-2 in posterior oropharyngeal (deep throat) saliva samples from patients with COVID-19, and serum antibody responses.
方法は以下の通りです。:
香港の2つの病院でコホート研究を行った。実験室で確認されたCOVID-19の患者を対象とした。血液、尿、口腔咽頭後面の唾液、直腸スワブを採取した。逆転写酵素定量PCR（RT-qPCR）により，連続したウイルス量を確認した．SARS-CoV-2の内部核タンパク質（NP）および表面スパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（RBD）に対する抗体レベルをEIAを用いて測定した。感染時に生じる可能性のある突然変異を特定するために，全ゲノム配列の解析を行った。
METHODS: We did a cohort study at two hospitals in Hong Kong. We included patients with laboratory-confirmed COVID-19. We obtained samples of blood, urine, posterior oropharyngeal saliva, and rectal swabs. Serial viral load was ascertained by reverse transcriptase quantitative PCR (RT-qPCR). Antibody levels against the SARS-CoV-2 internal nucleoprotein (NP) and surface spike protein receptor binding domain (RBD) were measured using EIA. Whole-genome sequencing was done to identify possible mutations arising during infection.
結果:
2020年1月22日から2020年2月12日の間に、30人の患者がスクリーニングされ、そのうち23人が組み入れられた（年齢中央値62歳［範囲37～75歳］）。来院時の後口腔咽頭唾液またはその他の呼吸器検体におけるウイルス量の中央値は、5～2 log copies per mL（IQR 4-1～7-0）であった。唾液中のウイルス量は，発症後1週間で最も高く，その後，時間の経過とともに減少した（傾き-0-15，95％CI -0-19～-0-11，R=0-71）．また、発症後25日目にウイルスRNAが検出された患者もいました。年齢の高さとウイルス量の多さは相関していた（スピアマンのρ=0-48、95%CI 0-074-0-75、p=0-020）。発症後14日以上経過した血清サンプルが得られた16名の患者の血清陽性率は、抗NP IgGが94％（n=15）、抗NP IgMが88％（n=14）、抗RBD IgGが100％（n=16）、抗RBD IgMが94％（n=15）であった。抗SARS-CoV-2-NPまたは抗SARS-CoV-2-RBD IgGレベルは、ウイルス中和価と相関した（R>0-9）。連続したサンプルでは，ゲノム変異は検出されなかった．
FINDINGS: Between Jan 22, 2020, and Feb 12, 2020, 30 patients were screened for inclusion, of whom 23 were included (median age 62 years [range 37-75]). The median viral load in posterior oropharyngeal saliva or other respiratory specimens at presentation was 5·2 log copies per mL (IQR 4·1-7·0). Salivary viral load was highest during the first week after symptom onset and subsequently declined with time (slope -0·15, 95% CI -0·19 to -0·11; R=0·71). In one patient, viral RNA was detected 25 days after symptom onset. Older age was correlated with higher viral load (Spearman's ρ=0·48, 95% CI 0·074-0·75; p=0·020). For 16 patients with serum samples available 14 days or longer after symptom onset, rates of seropositivity were 94% for anti-NP IgG (n=15), 88% for anti-NP IgM (n=14), 100% for anti-RBD IgG (n=16), and 94% for anti-RBD IgM (n=15). Anti-SARS-CoV-2-NP or anti-SARS-CoV-2-RBD IgG levels correlated with virus neutralisation titre (R>0·9). No genome mutations were detected on serial samples.
解釈:
口腔咽頭唾液サンプルは、患者や医療従事者に受け入れられやすい非侵襲的な検体である。重症急性呼吸器症候群とは異なり、COVID-19の患者は発症直後に最も高いウイルス量を示し、この流行の急速な広がりを説明することができた。この結果は、厳格な感染管理と、高リスク者に対する強力な抗ウイルス剤の単独または併用による早期使用の重要性を強調するものである。血清学的検査は、RT-qPCRによる診断を補完するものである。
INTERPRETATION: Posterior oropharyngeal saliva samples are a non-invasive specimen more acceptable to patients and health-care workers. Unlike severe acute respiratory syndrome, patients with COVID-19 had the highest viral load near presentation, which could account for the fast-spreading nature of this epidemic. This finding emphasises the importance of stringent infection control and early use of potent antiviral agents, alone or in combination, for high-risk individuals. Serological assay can complement RT-qPCR for diagnosis.
資金提供:
Richard and Carol Yu, May Tam Mak Mei Yin, The Shaw Foundation Hong Kong, Michael Tong, Marina Lee, Government Consultancy Service, and Sanming Project of Medicine.
FUNDING: Richard and Carol Yu, May Tam Mak Mei Yin, The Shaw Foundation Hong Kong, Michael Tong, Marina Lee, Government Consultancy Service, and Sanming Project of Medicine.
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