S1P3サイレンシングは自然発症高血圧ラットの勃起機能を改善する

[S1P3 silencing improves the erectile function of spontaneous hypertension rats].

• Jian-Guo Chen
• Rui Jiang

抄録

目的:

本研究では、S1P3サイレンシングによる自然発症高血圧ラット（SHR）の勃起機能改善効果を検討することを目的とした。

Objective: To investigate the improving effect of S1P3 silencing on the erectile function of spontaneous hypertension rats (SHR).

方法:

5匹の12週齢健常雄WKYラットをA群に、別の15匹の12週齢健常雄SHRをB1群に等しく無作為に割り付けた（20μを20μで頭蓋内注射した）。l S1P3 siRNAレンチウイルスベクター［2 ×108TU/ml］、B2（20μl GFPレンチウイルスベクター［2 ×108TU/ml］を胸腔内注射）、およびC（コントロール）に等しく無作為化した。トランスフェクション後１週間後に、ラットの最大胸腔内圧／平均動脈圧（ＩＣＰｍａｘ／ＭＡＰ）の比を測定し、海綿体組織におけるＳ１Ｐ３、ＲＯＣＫ１、ＲＯＣＫ２及びｅＮＯＳの発現を免疫組織化学、ウエスタンブロット及びＲＴ-ｑＰＣＲにより決定した。

METHODS: Five 12-week-old healthy male WKY rats were included in group A and another 15 12-week-old healthy male SHRs equally randomized into groups B1 (intracavernously injected with 20 μl S1P3 siRNA lentiviral vectors ［2 ×108TU/ml］), B2 (intracavernously injected with 20 μl GFP lentiviral vectors ［2 ×108TU/ml］), and C (control). At 1 week after transfection, the ratio of the maximum intracavernous pressure/mean arterial pressure (ICPmax/MAP) of the rats was measured, and the expressions of S1P3, ROCK1, ROCK2 and eNOS in the corpus cavernosal tissue were determined by immunohistochemistry, Western blot and RT-qPCR.

結果:

3群のラット間で体重と血清T値に統計的に有意な差はなかった。0V、3V及び5Vの電気刺激下で、ICPmax/MAPの比は、A群では0.16±0.01、0.55±0.03及び0.82±0.02、B1群では0.15±0.01、0.55±0.01及び0.79±0.03であったが、B1群では0.15±0.01、0.55±0.01及び0.79±0.03であった。B2群では10±0.00、0.22±0.01および0.43±0.01、C群では0.11±0.01、0.22±0.01および0.42±0.02であり、前者2群よりも後者2群の方が有意に低かった（P＜0.05）。また、海綿体におけるS1P3、ROCK1、ROCK2のタンパク質発現は、A群、B1群では、B2群、C群と比較して、eNOSの発現が上昇しているのに対し、著しく低下していた（P < 0.05）。また、A群およびB1群は、B2およびC群と比較して、S1P3のmRNA発現が著しく低下していた(0.72±0.04および0.71 &#xB1; 0.07)。71±0.07 vs 1.00±0.06および1.00±0.10、P＜0.05）、ROCK1（0.99±0.05および1.08±0.16 vs 1.85±0.44および2.02 &#xB1；0.99±0.05および1.08±0.16、P＜0.05）、ROCK1（0.99±0.05および1.08±0.16 vs 1.85±0.44および2.02±0.38、P＜0.05）およびROCK2（1.00±0.03および1.08±0.16 vs 2.16±0.78および2.46±0．69、P＜0.05）であったが、eNOSは増加した（1.04±0.15および0.81±0.23 vs 0.32±0.08および0.32±0.04、P＜0.05）。

RESULTS: There were no statistically significant differences in the body weight and serum T level among the three groups of rats. Under 0 V, 3 V and 5 V electrical stimulation, the ratios of ICPmax/MAP were 0.16 ± 0.01, 0.55 ± 0.03 and 0.82 ± 0.02 in group A, 0.15 ± 0.01, 0.55 ± 0.01 and 0.79 ± 0.03 in group B1, 0.10 ± 0.00, 0.22 ± 0.01 and 0.43 ± 0.01 in group B2, and 0.11 ± 0.01, 0.22 ± 0.01 and 0.42 ± 0.02 in group C, significantly lower in the latter two than in the former two groups (P < 0.05). The protein expressions of S1P3, ROCK1 and ROCK2 in the corpus cavernosum were remarkably down-regulated while that of eNOS up-regulated in groups A and B1 compared with those in groups B2 and C (P < 0.05). Groups A and B1, in comparison with B2 and C, also showed markedly decreased mRNA expressions of S1P3 (0.72 ± 0.04 and 0.71 ± 0.07 vs 1.00 ± 0.06 and 1.00 ± 0.10, P < 0.05), ROCK1 (0.99 ± 0.05 and 1.08 ± 0.16 vs 1.85 ± 0.44 and 2.02 ± 0.38, P < 0.05) and ROCK2 (1.00 ± 0.03 and 1.08 ± 0.16 vs 2.16 ± 0.78 and 2.46 ± 0.69, P < 0.05), but increased eNOS (1.04 ± 0.15 and 0.81 ± 0.23 vs 0.32 ± 0.08 and 0.32 ± 0.04, P < 0.05).

結論:

S1P3 siRNAは、S1P3遺伝子の発現を阻害し、海綿体のRhoA/Rhoキナーゼシグナル伝達経路をダウンレギュレーションすることで、SHRの勃起機能を改善することができます。

CONCLUSIONS: S1P3 siRNA can improve the erectile function of SHRs by inhibiting the expression of the S1P3 gene and down-regulating the RhoA/Rho kinase signaling pathway in the corpus cavernosum.