Streptococcus agalactiae 感染に応答するナイルティラピア（Oreochromis niloticus）における CD2AP の分子クローニング、特徴、および発現プロファイル、および CD2 細胞質セグメントとの相互作用

/ /

日本語AIでPubMedを検索

PubMedの提供する医学論文データベースを日本語で検索できます。AI(Deep Learning)を活用した機械翻訳エンジンにより、精度高く日本語へ翻訳された論文をご参照いただけます。

Fish Shellfish Immunol..2020 Jun;101:205-215. S1050-4648(20)30222-9. doi: 10.1016/j.fsi.2020.03.054.Epub 2020-04-01.

Streptococcus agalactiae 感染に応答するナイルティラピア（Oreochromis niloticus）における CD2AP の分子クローニング、特徴、および発現プロファイル、および CD2 細胞質セグメントとの相互作用

Molecular cloning, characterization and expression profiles of CD2AP in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) responding to Streptococcus agalactiae infection and interaction with CD2 cytoplasmic segment.

Yuan Li
Bei Wang
Zhi-Wen Wang
Yu Huang
Ji-Chang Jian
Yi-Shan Lu

PMID: 32247045 DOI: 10.1016/j.fsi.2020.03.054.

抄録

CD2-associated protein（CD2AP）とCD2との相互作用は、哺乳類のリンパ球接着やT細胞の活性化に重要な役割を果たしている。本研究では、ティラピア（Oreochromis niloticus）からCD2AP遺伝子（GenBank accession number: MK579862; On-CD2AP）を同定した。配列解析の結果、On-CD2APタンパク質は、3つのSrcホモロジー3（SH3）ドメイン、ポリプロリンモチーフの一部、コイル状のコイル領域など、哺乳類と高い共通性を有していることが明らかになった。健康なナイルティラピアの9つの組織でOn-CD2APの転写レベルが検出され、脾臓と鰓で最も高い発現レベルが検出された。その結果、Streptococcus agalactiaeに感染したナイルティラピアの胸腺、頭腎臓、脳、およびLPSやLTA刺激を受けた頭腎臓白血球（HKL）では、On-CD2APの発現が有意に上昇した。さらに、ナイルティラピアのCD2細胞質配列（On-CD2C）には、CD2とCD2APの結合に関与するプロリッチモチーフが保存されていた。また、On-CD2APとOn-CD2Cの間には弱い相互作用があることが、酵母の二種混合アッセイによって証明された。さらに、CD2AP-His（rOn-CD2AP-His）とGST-CD2C（GST-rOn-CD2C）の組換えタンパク質を原核生物発現系で得た。彼のプルダウンアッセイにより、rOn-CD2AP-HisとGST-rOn-CD2Cは互いに結合し得ることが示された。これらの知見は、CD2APがS.agalactiae感染時の免疫応答に重要であること、CD2APとCD2の相互作用機構がナイルティラピアでは保守的であることを示唆している。

The interaction between CD2-associated protein (CD2AP) and CD2 plays a vital role in lymphocyte adhesion and T cells activation in mammals. In this study, a CD2AP gene (GenBank accession number: MK579862; designated as On-CD2AP) was identified from tilapia (Oreochromis niloticus). Sequence analysis showed that On-CD2AP protein shares high similarity with mammals, including three Src homology 3 (SH3) domains, a section of poly proline motif and a coiled coil region. Transcription levels of On-CD2AP were detected in nine tissues of healthy Nile tilapia, and the highest expression levels were detected in the spleen and gill. On-CD2AP were significantly up-regulated in thymus, head kidney and brain after infected by Streptococcus agalactiae, as well as in head kidney leukocytes (HKLs) with LPS and LTA stimulation. Moreover, a section conserved pro-rich motif that are responsible for binding of CD2 to CD2AP were found in the CD2 cytoplasmic sequence of Nile tilapia (On-CD2C). A weak interaction between On-CD2AP and On-CD2C was proved by yeast two-hybrid assay. In addition, the recombinant proteins of CD2AP-His (rOn-CD2AP-His) and GST-CD2C (GST-rOn-CD2C) were obtained through prokaryotic expression system. His pull-down assay showed that rOn-CD2AP-His and GST-rOn-CD2C could bind to each other. These findings indicate that CD2AP is crucial in immune response during S.agalactiae infection, and the mechanism of interaction between CD2AP and CD2 is conservative in Nile tilapia.