ステロイドホルモン受容体の変異体および変異体の転写活性の定量的評価 2 つのレポーターと受容体発現カセットを持つ単一ベクターを用いたステロイドホルモン受容体の変異体および変異体の転写活性の定量的評価

Quantitative Evaluation of the Transcriptional Activity of Steroid Hormone Receptor Mutants and Variants Using a Single Vector With Two Reporters and a Receptor Expression Cassette.

• Huimin Ji
• Ying Li
• Zhao Liu
• Min Tang
• Lihui Zou
• Fei Su
• Yaqun Zhang
• Junhua Zhang
• Hexin Li
• Lin Li
• Bin Ai
• Jie Ma
• Lunan Wang
• Ming Liu
• Fei Xiao

抄録

ハイスループットシーケンシングの急速な発展により、多数の切断または変異したステロイドホルモン受容体（SHR）変異体が同定されていますが、それらの臨床的な関連性はいまだに定義されていません。細胞内のこれらのSHR変異体の機能解析のためのプラットフォームは、正常な生理機能やSHR関連疾患への影響をより良く評価するのに役立つだろう。ここで我々は、細胞内の SHR バリアントの転写活性を迅速かつ正確に評価できる新しいレポーターシステムを開発した。このレポーターは、複数のステロイドホルモン応答性要素を有するプロモーターの制御下で発現するホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子と、内部リボソームエントリーサイト（ＩＲＥＳ）の制御下で構成的に発現し、ステロイドホルモンによって制御されないルシフェラーゼレポーター遺伝子を含む単一コンストラクトである。対応するＳＨＲ（野生型または変異体／変異体）もまた、同じ構築物から発現される。この改良されたレポーターシステムを用いて、アンドロゲン受容体（AR）、エストロゲン受容体α（ERα）、グルココルチコイド受容体（GR）の以前に同定された変異と変異のセットの中で、幅広いトランザクティベーション活性のスペクトルを明らかにした。この新しいレポーターシステムは、生理学的および病理学的環境でのSHR変異体および変異体の機能解析を可能にし、関連する疾患の理解と治療のための貴重な前臨床または診断情報を提供します。

Although the rapid development of high-throughput sequencing has led to the identification of a large number of truncated or mutated steroid hormone receptor (SHR) variants, their clinical relevance remains to be defined. A platform for functional analysis of these SHR variants in cells would be instrumental for better assessing their impact on normal physiology and SHR-associated diseases. Here we have developed a new reporter system that allows rapid and accurate assessment of the transcriptional activity of SHR variants in cells. The reporter is a single construct containing a firefly luciferase reporter gene, whose expression is under the control of a promoter with multiple steroid hormone responsive elements, and a luciferase reporter gene, that is constitutively expressed under the control of an internal ribosome entry site (IRES) and is not regulated by steroid hormones. The corresponding SHR (wildtype or mutant/variant) is also expressed from the same construct. Using this improved reporter system, we revealed a large spectrum of transactivation activities within a set of previously identified mutations and variations of the androgen receptor (AR), the estrogen receptor α (ERα) and the glucocorticoid receptor (GR). This novel reporter system enables functional analysis of SHR mutants and variants in physiological and pathological settings, offering valuable preclinical, or diagnostic information for the understanding and treatment of associated diseases.

Copyright © 2020 Ji, Li, Liu, Tang, Zou, Su, Zhang, Zhang, Li, Li, Ai, Ma, Wang, Liu and Xiao.