miR-21はCDK6を標的とすることで、リポ多糖に刺激された急性腎障害やアポトーシスを抑制することが示唆された

miR-21 protects against lipopolysaccharide-stimulated acute kidney injury and apoptosis by targeting CDK6.

• Wei Wei
• Yuan-Yuan Yao
• Hong-Yuan Bi
• Zhe Zhai
• Yan Gao

抄録

背景:

敗血症性急性腎障害（AKI）は腎機能の急激な低下を引き起こし、集中治療室での死亡率の主な原因となっている。敗血症患者ではmiR-21の制御異常が証明されているが、AKIにおける細胞アポトーシスの媒介におけるmiR-21の役割についてのエビデンスは乏しい。

Background: Septic acute kidney injury (AKI) causes a sharp deterioration of renal function, and it is a major reason for mortality in intensive care units. Although miR-21 has been proven to be dysregulated in patients with sepsis, the evidence is scarce concerning its role in mediating cellular apoptosis in AKI.

方法:

マウスを10mg/kgのリポ多糖類（LPS）で腹腔内注射して敗血症性AKIモデルを確立し、miR-21の発現を操作するためにmiR-21ミミックとインヒビターを使用し、クレアチニンレベルをクレアチニンアッセイキットで検出した。腎細胞の増殖とアポトーシスを MTT アッセイ、フローサイトメトリーアッセイ、アクリジンオレンジ/エチジウムブロマイド（AO/EB）蛍光染色で検出し、腎機能を腎組織学と尿細管損傷スコアで評価し、標的タンパク質レベルを検出するためにウエスタンブロット分析を使用しました。miR-21の下流標的を示すためにいくつかのバイオインフォマティクスツールを実行し、ルシフェラーゼレポーターアッセイとカスパーゼ-3活性アッセイによってさらに確認した。

Methods: Mice were injected intraperitoneally with 10 mg/kg of lipopolysaccharide (LPS) to establish septic AKI model, miR-21 mimic and inhibitor were used to manipulate the expression of miR-21, the creatinine levels were detected by a creatinine assay kit, the renal cell proliferation and apoptosis were detected by MTT assay, flow cytometry assay and acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) fluorescence staining, the renal function was evaluated by renal histology and tubular injury score, western blot analysis was used to detect the target protein levels. Several bioinformatics tools were performed to show the downstream target of miR-21, and further confirmed by luciferase reporter assay and caspase-3 activity assay.

結果:

その結果、miR-21サイレンシングは腎機能を促進し、LPS刺激による腎細胞のアポトーシスを減少させ、Bax/Bcl-2比やカスパーゼ-3活性を減少させることが明らかになった。一方、miR-21を過剰発現させた場合には、逆の効果が得られた。また、サイクリン依存性キナーゼ6（CDK6）はmiR-21の標的遺伝子として確認され、腎細胞のアポトーシスと関連していた。また、敗血症性AKIにおいてもmiR-21の発現が上昇していることが確認された。

Results: miR-21 silencing was able to promote renal function and decrease LPS-stimulated renal cell apoptosis and , and it could decrease the Bax/Bcl-2 ratio and caspase-3 activity. On the contrary, miR-21 overexpression had the opposite effects. Cyclin-dependent kinase 6 (CDK6) was confirmed as a target gene of miR-21 and was associated with renal cell apoptosis. Moreover, miR-21 was also found to be up-regulated in septic AKI.

結論:

現在、miR-21は敗血症性AKIの治療に応用できる可能性があることが示唆されている。

Conclusions: Current evidences suggest that miR-21 has a potential application in treating septic AKI.

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