接着タンパク質65を標的としたループ媒介等温増幅法を用いたトリコモナス膣炎の簡便な検出法の開発

Development of a convenient detection method for Trichomonas vaginalis based on loop-mediated isothermal amplification targeting adhesion protein 65.

• Yuhua Li
• Shuai Wang
• Haoran Li
• Xiaoxiao Song
• Hao Zhang
• Yujuan Duan
• Chengyang Luo
• Bingli Wang
• Sifan Ji
• Qing Xie
• Zhenchao Zhang

抄録

背景:

トリコモナス膣炎（T. vaginalis）を原因とするトリコモナス膣炎は、性行為を媒介とした感染症と考えられています。現在、T. vaginalisの検出法としては、主に湿式顕微鏡法、培養法、PCR法、免疫蛍光法、ELISA法などがある。しかし、これらの検出法はいずれも欠点があります。

BACKGROUND: Trichomoniasis resulting from Trichomonas vaginalis (T. vaginalis) has been considered as a commonly seen disease with the transmission way of sex. At present, the detection methods of T. vaginalis mainly include wet mount microscopy, culture, PCR, immunofluorescence and ELISA. However, all of these detection methods exist shortcomings.

方法:

本研究では，T. vaginalisを検出するために，接着タンパク質65（AP65）遺伝子の種特異的配列を標的としたループ媒介等温増幅（LAMP）法を開発した．この迅速検出法では、最適な反応系と条件が最適化されていた。

METHODS: In this study, a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay that targeted the species-specific sequence of adhesion protein 65 (AP65) gene had been conducted to detect T. vaginalis. The optimum reaction system and conditions were optimized in this rapid detection method.

結果:

感度解析の結果、AP65遺伝子を標的としたLAMPアッセイは、T. vaginalisの検出に一般的に用いられているアクチン遺伝子を標的としたネストドPCRに比べて1000倍の感度を有し、前者の検出限界は10トリコモナドであることが示された。また、LAMP法による標的遺伝子AP65の増幅は高い特異性を示し、その産物はT. vaginalis由来のもののみであった。また，LAMP法の検出法は，Trichinella spiralis，Toxoplasma gondii，Escherichia coli，Candida albicans，Staphylococcus aureus，Haemophilusなどの一般的な病原体との交差反応性を示さなかった。

RESULTS: The results of sensitivity analysis showed that the LAMP assay targeting the AP65 gene was 1000 times more sensitive than the nested PCR targeting the actin gene commonly used for detection of T. vaginalis, and the detecting limitation of the former was 10 trichomonad. Moreover, the amplification of the target gene AP65 by LAMP assay exhibited high specificity and the product was exclusively from T. vaginalis. The detection technique of LAMP did not exhibit cross-reactivity with the common pathogens of Trichinella spiralis, Toxoplasma gondii, Escherichia coli, Candida albicans, Staphylococcus aureus, Haemophilus.

結論:

本研究では、AP65遺伝子を標的としたLAMP法は、T. vaginalis感染症の早期診断に適していることが明らかになった。その結果、LAMP法はトリコモナス膣炎感染症の早期診断に適しており、トリコモナス膣炎感染症の治療・管理・予防や合併症の予防に役立つ可能性を秘めたポイントオブケア検査・代替分子ツールとして提案された。

CONCLUSIONS: According to the present study, the LAMP assay with the target of AP65 gene, was suitable for the early diagnosis of T. vaginalis infections. Consequently, the LAMP assay was proposed by the current study as a point-of-care examination and an alternative molecular tool which exhibited the potential value in the treatment, control and prevention of trichomoniasis transmission and relevant complication.