KaempferolはmiR-15b/Bcl-2/TLR4を制御し、H9c2細胞におけるOGD誘発障害を緩和する

Kaempferol Regulates miR-15b/Bcl-2/TLR4 to Alleviate OGD-Induced Injury in H9c2 Cells.

• Linping Li
• Yuanxia Shao
• Hongjian Zheng
• Heng Niu

抄録

虚血性心疾患（IHD）は、世界でも有数のヒトの死因の一つです。カエンフェロール(Kae)は、抗炎症作用、抗酸化作用、抗がん作用があることが証明されています。このような特性から、カエンフェロールはIHDにおいて保護的な役割を果たしている可能性が示唆されています。本研究では、初代心筋細胞およびH9c2細胞におけるKaeの潜在的な制御機構を明らかにすることを試みた。細胞の特性を調べるためにCCK-8アッセイとフローサイトメトリーを用いた。定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を利用して、miR-15bおよびTLR4の発現レベルを試験した。その後、細胞トランスフェクション、デュアルルシフェラーゼ活性アッセイ、ウエスタンブロットを用いて、潜在的なメカニズムを検討した。さらに、OGDはアポトーシス関連タンパク質の発現を増加させた。一方、加齢に伴うアポトーシス関連タンパク質の発現量は増加した。さらに実験の結果、Kae曝露はmiR-15bのダウンレギュレーションを促進し、Bcl-2やTLR4はmiR-15bの標的となっていた。さらに、KaeはPI3K/AKTやWnt/β-カテニン経路に関与する主要因子の発現を亢進させ、miR-15bマイミックはKaeの作用を逆転させることがわかった。

Ischemic heart disease (IHD) is one of the world's leading causes of human death. Kaempferol (Kae) was proved to have anti-inflammatory, antioxidant, and anticancer effects. Such properties suggested that it might play protective roles in IHD. In this study, we have attempted to disclose the potential regulating mechanisms of Kae in primary cardiomyocytes and H9c2 cells.Cells were first stimulated by oxygen-glucose deprivation (OGD) and then exposed to Kae. CCK-8 assay and flow cytometry were used to examine cell characteristics. Quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction was utilized to test the expression levels of miR-15b and TLR4. Afterward, cell transfection, dual-luciferase activity assay, and western blot were used to explore the potential mechanisms.OGD treatment suppressed cell viability, whereas it enhanced cell apoptosis. Besides, OGD treatment enhanced the expression of apoptosis-associated proteins. Kae exposure, however, attenuated the effects that OGD-induced. Further experiments showed that Kae exposure promoted down-regulation of miR-15b, Bcl-2 and TLR4 were a target of miR-15b. Moreover, Kae enhanced the expression of key factors involved in PI3K/AKT and Wnt/β-catenin pathways, whereas miR-15b mimic reversed the Kae-triggered effects.This investigation revealed that Kae diminished OGD-triggered cell damage through down-regulating miR-15b expression via activating PI3K/AKT and Wnt3a/β-catenin pathways.