Circ-RNF111はmiR-140-5pを介してE2F3の発現を上昇させることで乳がんのパクリタキセル抵抗性に寄与している

Circ-RNF111 contributes to paclitaxel resistance in breast cancer by elevating E2F3 expression via miR-140-5p.

• Hongliang Zang
• Yuhui Li
• Xue Zhang
• Guomin Huang

抄録

背景:

サーキュラーRNA（circRNA）は、乳癌（BC）を含むヒト癌の化学抵抗性において重要な調節因子として作用することが実証されている。ここでは、BCのパクリタキセル（PTX）抵抗性におけるcirc-RNF111の役割を探ることを目的とした。

BACKGROUND: Circular RNAs (circRNAs) have been demonstrated to act as key regulators in the chemoresistance of human cancers, including breast cancer (BC). Here, we aimed to explore the role of circ-RNF111 in paclitaxel (PTX) resistance of BC.

方法:

定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）を用いて、circ-RNF111、microRNA-140-5p（miR-140-5p）およびE2F転写因子3（E2F3）mRNAの発現を測定した。PTX の半最大阻害濃度（IC ）、細胞生存率、コロニー形成、細胞浸潤について、セルカウンティングキット-8（CCK-8）アッセイ、コロニー形成アッセイ、トランスウェルアッセイを用いて評価した。グルコース消費量および乳酸産生量は、特定のキットを用いて決定した。インビボでのBCのPTX抵抗性におけるcirc-RNF111の役割を調べるために、マウス異種移植モデルを確立した。miR-140-5pとcirc-RNF111またはE2F3との関係を検証するために、デュアルルシフェラーゼレポーターアッセイおよびRNA免疫沈降（RIP）アッセイを行った。E2F3のタンパク質レベルを調べるためにウエスタンブロットアッセイを行った。

METHODS: Quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was employed to determine the expression of circ-RNF111, microRNA-140-5p (miR-140-5p) and E2F transcription factor 3 (E2F3) mRNA. The half maximal inhibitory concentration (IC ) of PTX, cell viability, colony formation and cell invasion were assessed by cell counting kit-8 (CCK-8) assay, colony formation assay and transwell assay, respectively. Glucose consumption and lactate production were determined by specific kits. A murine xenograft model was established to investigate the role of circ-RNF111 in PTX resistance of BC in vivo. Dual-luciferase reporter assay and RNA immunoprecipitation (RIP) assay were performed to verify the relationship between miR-140-5p and circ-RNF111 or E2F3. Western blot assay was conducted to examine the protein level of E2F3.

結果:

Circ-RNF111は、PTX耐性BC組織および細胞で発現が上昇した。Circ-RNF111をノックダウンすると、PTX耐性BC細胞では、in vitroではPTXのIC、細胞生存率、コロニー数、細胞浸潤、解糖が抑制され、in vivoではPTX感受性が増強された。MiR-140-5pはcirc-RNF111の標的であり、BC組織ではmiR-140-5pの発現はcirc-RNF111の発現と負の相関があった。circ-RNF111のノックダウンによるPTX抵抗性への影響は、miR-140-5pの欠失により救済された。また、miR-140-5pはE2F3と相互作用し、E2F3の発現をネガティブに制御していた。さらに、miR-140-5pはE2F3を標的とすることで、PTXのIC、細胞生存率、コロニー数、細胞浸潤、解糖を抑制した。

RESULTS: Circ-RNF111 was upregulated in PTX-resistant BC tissues and cells. Circ-RNF111 knockdown restrained IC of PTX, cell viability, colony numbers, cell invasion and glycolysis in PTX-resistant BC cells in vitro and enhanced PTX sensitivity in vivo. MiR-140-5p was a target of circ-RNF111 and miR-140-5p expression was negatively correlated with circ-RNF111 expression in BC tissues. The effect of circ-RNF111 knockdown on PTX resistance was rescued by miR-140-5p deletion. Additionally, miR-140-5p could interact with E2F3 and negatively regulate E2F3 expression. Moreover, miR-140-5p suppressed IC of PTX, cell viability, colony numbers, cell invasion and glycolysis by targeting E2F3.

結論:

Circ-RNF111はmiR-140-5pをスポンギングすることでE2F3をアップレギュレートし、BCのPTX耐性を改善した。

CONCLUSIONS: Circ-RNF111 improved PTX resistance of BC by upregulating E2F3 via sponging miR-140-5p.

© 2020 The Authors. Thoracic Cancer published by China Lung Oncology Group and John Wiley & Sons Australia, Ltd.