新しいヒト角膜上皮細胞株の単離と特性評価：HCE-F

Isolation and Characterization of a New Human Corneal Epithelial Cell Line: HCE-F.

• Martina Cristaldi
• Melania Olivieri
• Giorgia Spampinato
• Carmelina Daniela Anfuso
• Marina Scalia
• Gabriella Lupo
• Dario Rusciano

抄録

目的:

生体分子の問題に対処し、ストレスイベントや治療法に対する角膜上皮の応答を研究するための信頼性の高い試験細胞株として役立つ可能性のあるヒトドナー角膜から上皮細胞（EC）株を単離し、特徴付けること。

PURPOSE: To isolate and characterize an epithelial cell (EC) line from a human donor cornea, which may serve as a reliable test cell line to address biomolecular issues and study the response of corneal epithelium to stressing events and therapeutic treatments.

方法:

ドナー患者の角膜ボタンを酵素処理して上皮シートを分離し、遊離したECを組織培養に入れた。ECは光学顕微鏡および電子顕微鏡で特徴づけ、サイトケラチンおよびPAX6はSDS-PAGEおよびウェスタン免疫ブロッティングで検出し、バリア機能は経上皮電気抵抗および膜接合タンパク質の免疫検出で評価し、核型は古典的な方法に従って特徴づけた。

METHODS: A corneal button from a donor patient was treated with enzymes to separate the epithelial sheet and to free EC, which were put in tissue culture. ECs were characterized by optic and electronic microscopies, cytokeratins and PAX6 were detected by SDS-PAGE and western immunoblotting, the barrier function was evaluated by transepithelial electric resistance and by the immune detection of membrane junction proteins, and the karyotype was characterized according to the classical methods.

結果:

形態学的解析の結果、ECによって予想されるような古典的な均質な多角形の形態が、時間の経過と数回のin vitroで維持されていた。経上皮電気抵抗値は、典型的なバリア形成細胞株の特徴的な値であった。サイトケラチンの発現パターンは角膜ECで予想されるもので、CK3とCK5が優勢であり、ヒト角化細胞株とは異なっていた。男性の核型は8番染色体と11番染色体の2つのトリソミーを示した。

RESULTS: Morphological analyses returned the picture of classical homogeneous polygonal morphology as expecetd by EC that was maintained over time and several in vitro passages. Transepithelial electric resistance values were characteristic of a typical barrier-forming cell line. The cytokeratin expression pattern was the one expected for corneal EC with a predominance of CK3 and CK5 and different from a human keratocyte cell line. The male karyotype showed 2 trisomies, of chromosomes 8 and 11.

結論:

HCE-F細胞でこれまでに得られたすべてのデータは、この細胞株が安定した真の初代ヒト角膜EC株であることを証明するものであり、ストレスや治療に対するヒト角膜上皮の生物学的応答に関する問題を研究し、対処するための試験細胞株として、また病理学的角膜由来のECの比較対象として使用することができる。

CONCLUSIONS: All the data so far obtained with the HCE-F cells concur to certify this cell line as a stable, true primary human corneal EC line, which could then be used as a test cell line to study and address the questions concerning the biological response of human corneal epithelium to stressing and/or therapeutic treatments and as a term of comparison for EC derived from pathological corneas.