BAF複合体のサブユニットを含む一連のアセチル化タンパク質を認識する抗体の作製

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Biochem Biophys Rep.2020 Jul;22:100720. S2405-5808(19)30197-9. doi: 10.1016/j.bbrep.2019.100720.Epub 2019-12-14.

BAF複合体のサブユニットを含む一連のアセチル化タンパク質を認識する抗体の作製

Generation of an antibody recognizing a set of acetylated proteins, including subunits of BAF complexes.

Masatoshi Takagi

PMID: 32490211 PMCID: PMC7261705. DOI: 10.1016/j.bbrep.2019.100720.

抄録

本研究の目的は、リジン3180でアセチル化されたKi-67に特異的な抗体を生成することであり、その存在はアセチローム研究で報告されています(Scholz, C., B.T. Weinert, S.T. Wagner, P. Beli, Y. Miyake, J. Qi, L.J.ensen, W. Streicher, A.R. McCarthy, N.N.B.T. Weinert、S.A. Wagner、P. Beli、Y. Miyake、J. Qi、L.J. Jensen、W. Streicher、A.R. McCarthy、N.J. Westwood、S. Lain、J. Cox、P. Matthias、M. Mann、J.E. Bradner、およびC. Choudhary.2015).ウサギを、Ｋｉ-６７のアセチル化リジン３１８０およびそれに隣接する残基に対応する合成アセチル化ペプチドで免疫した。得られた抗体（本研究ではAb3180と呼ぶ）を抗原ペプチドと親和性精製し、特徴付けを行った。Ab3180 を用いた細胞抽出物のイムノブロット解析の結果、この抗体は、Ki-67 とは無関係なアセチル化タンパク質を予期せず認識することが明らかになった。Ab3180で認識可能なタンパク質は、厳しい条件で細胞抽出物から免疫沈降され、質量分析によりBAF(哺乳類SWI/SNF)クロマチンリモデリング複合体のサブユニットとして同定された。Ab3180のユニークな特異性により、この抗体は、BAF複合体のアセチル化およびBAF複合体の形成/機能への意義を解析するための有用なツールとなるでしょう。

The aim of this study was to generate an antibody specific to Ki-67 acetylated at lysine 3180, whose existence was reported in an acetylome study (Scholz, C., B.T. Weinert, S.A. Wagner, P. Beli, Y. Miyake, J. Qi, L.J. Jensen, W. Streicher, A.R. McCarthy, N.J. Westwood, S. Lain, J. Cox, P. Matthias, M. Mann, J.E. Bradner, and C. Choudhary. 2015). Rabbits were immunized with a synthetic acetylated peptide corresponding to acetylated lysine 3180 of Ki-67 and the residues flanking it. The obtained antibody, referred to as Ab3180 in this study, was affinity purified with the antigen peptide and characterized. Immunoblot analysis of cell extracts using Ab3180 revealed that this antibody unexpectedly recognized a set of acetylated proteins unrelated to Ki-67. Ab3180-recognizable proteins were immunoprecipitated from cell extracts in a stringent condition and identified by mass-spec analysis as subunits of BAF (mammalian SWI/SNF) chromatin remodeling complexes. The unique specificity of Ab3180 will allow this antibody to be a useful tool for analyzing the acetylation of BAF complexes and its significance to the formation/function of BAF complexes.