インターロイキン-1αのN-terminal propieceに対する新しい酵素結合免疫吸着測定系

A new enzyme-linked immunosorbent assay system against the N-terminal propiece of interleukin-1α.

抄録

インターロイキン-1α（IL-1α）は、細胞内で前駆体（pIL-1α）の状態で産生されます。インターロイキン-1α（IL-1α）は、細胞内で前駆体（pIL-1α）として産生され、酵素によって切断されると、成熟体（mIL-1α）とプロピース（ppIL-1α）が産生されるが、これらのIL-1αには核内局在シグナルが存在するため、核内に局在すると考えられている。ppIL-1αの機能に関する研究は、ppIL-1α特異的な抗体（Ab）が存在しないことが障害となっていた。本研究では，組換えヒスチジンタグ付きppIL-1α（His-ppIL-1α）を免疫原として用いて，抗ppIL-1α抗体を作製した．ウサギにHis-ppIL-1αを免疫し，アフィニティ精製したAbを得た。抗体の反応性と特異性をウェスタンブロッティングで調べた。抗体は、トランスフェクタント由来の緑色蛍光タンパク質（GFP）タグ付きppIL-1αを認識したが、GFPは認識しなかった。また，抗ppIL-1α抗体をビオチン化して作製したサンドイッチ酵素結合免疫吸着法（ELISA）では，GFP-ppIL-1αを検出することができた。このAbとELISAシステムにより、ppIL-1αの機能解析が可能となり、ppIL-1αの理解が深まった。

Interleukin-1α (IL-1α) is produced inside cells in its precursor form (pIL-1α). Enzymatic cleavage yields mature (mIL-1α) and the propiece of IL-1α (ppIL-1α), which are thought to be localized in the nucleus, because of the presence of nuclear localizing signals. Studies of ppIL-1α function have been hampered by the lack of a ppIL-1α-specific antibody (Ab). In the present study, the authors generated anti-ppIL-1α Ab by using recombinant histidine-tagged ppIL-1α (His-ppIL-1α) as an immunogen. Rabbits were immunized with His-ppIL-1α, and affinity-purified Ab was obtained. Ab reactivity and specificity were examined by Western blotting. The antibody successfully recognized transfectant-derived green fluorescence protein (GFP)-tagged ppIL-1α but not GFP. A sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system established by biotinylating the anti-ppIL-1α Ab successfully detected GFP-ppIL-1α. The Ab and ELISA system allows functional analysis of ppIL-1α and improves understanding of ppIL-1α.