抗生物質検出のための改良された繰延アンタゴニズム技術

Improved deferred antagonism technique for detecting antibiosis.

• J M Klein
• V O Stockwell
• G V Minsavage
• G E Vallad
• E M Goss
• J B Jones

抄録

繰延アンタゴニズム技術は、抗生物質活性を検出するために数十年にわたって利用されてきた。ほとんどのプロトコルは、完了するために追加の時間と費用を必要とする濾液のステップを滅菌クロロホルム蒸気、UV放射線またはフィルターにそれらを公開することにより、抗生物質を産生する細胞を排除する必要があります。我々は、生産者ではなく、指標株の成長を阻害するためにソフト寒天オーバーレイに抗生物質を追加することを含む、現在のソフト寒天オーバーレイの慣行に修正されたアプローチを提供します。この手法は、再現性が高く、効率的に抗生物質生産のスクリーニングを容易に行うために使用することができます。我々は、3つの細菌系でこの技術の有効性を実証した：トマトの病原体の細菌のスポットの阻害、その病原性の競争相手Xanthomonas perforansによるXanthomonas euvesicatoria、;と火の病気の病原体、Erwinia amylovoraの阻害、Pantoea vagans C9-1またはPseudomonas fluorescens A506によるものである。研究の意義と影響。繰延アンタゴニズムアッセイは、一般的に微生物による抗生物質の生産を観察するために使用されています。指標株の導入前に生産者細胞を殺すか除去することは標準的な方法であるが、追加の時間と特別な取り扱い手順を必要とする。我々は、オーバーレイ培地を、指標株が耐性を持ち、生産者株が感受性を持つ抗生物質で調整するというアッセイの修正を評価した。この修正により、指標株とオーバーレイする前に生産者株を殺すための余分なステップが不要になり、抗生物質を検出するための迅速で一貫性のある費用対効果の高い方法が提供されます。

The deferred antagonism technique has been utilized for several decades for detecting antibiosis activity. Most protocols require the elimination of antibiotic-producing cells by exposing them to chloroform vapour, UV radiation or filter sterilizing the filtrate steps that require additional time and expense to complete. We provide a modified approach to current soft agar overlay practices, which involves addition of antibiotics to the soft agar overlay to inhibit growth of the producer but not the indicator strain. This technique can be used to reproducibly and efficiently screen for antibiotic production with ease. We demonstrate the effectiveness of this technique with three bacterial systems: inhibition of the bacterial spot of tomato pathogen, Xanthomonas euvesicatoria, by its pathogenic competitor Xanthomonas perforans; and inhibition of the fire blight pathogen, Erwinia amylovora, by Pantoea vagans C9-1 or Pseudomonas fluorescens A506. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: Deferred antagonism assays are used commonly to observe antibiotic production by micro-organisms. Killing or removing the producer cells prior to introduction of the indicator strain is a standard practice but requires additional time and special handling procedures. We evaluated a modification of the assay, where the overlay medium is amended with an antibiotic to which the indicator strain is resistant and the producer strain is sensitive. This modification obviates extra steps to kill the producer strain prior to overlaying with the indicator strain and provides a rapid, consistent and cost-effective method to detect antibiosis.

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