アジスロマイシンに対するモノクローナル抗体の作製とアジスロマイシン免疫測定法の確立

[Preparation of monoclonal antibody against azithromycin and establishment of immunoassay for azithromycin].

• Jing Xu
• Wenli Qi
• Aizhong Gao
• Youhua Xiong
• Lei Wang

抄録

目的 アジスロマイシン（AZM）のハプテンを有するマウスモノクローナル抗体（mAb）を調製し、その特徴を明らかにする。方法 AZM とウシ血清アルブミン（BSA）およびオーバルブミン（OVA）を活性化エステル法で結合させ、免疫原である AZM-BSA および被覆抗原である AZM-OVA を合成した。AZM-BSAで免疫したBALB/cマウスの脾臓細胞にマウス骨髄腫細胞Sp2/0を融合させてハイブリドーマ細胞株50D10を得た。その後、この細胞株をBALB/cマウスに注入してAZMに対するmAbを調製し、このmAbを用いたELISAにより検出した。結果 AZM mAbの力価は1:4.0×10であり、IgG1型に属していた。間接競合ELISAの感度は0.287μg/L、ICは1.33μg/Lであった。また、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、ドラメクチン、クラリスロマイシン、ティルミコシンおよびタイロシンとのmAbとの交差反応率は0.1%以下であった。また、乳中へのAZMの回収率は79.6％から104.1％であり、その変動係数は16.4％から27.3％であった。以上の結果から，高感度，高特異性のAZM mAbが調製され，AZMを迅速に検出する方法の確立に向けた基礎ができた。

Objective To prepare mouse monoclonal antibody (mAb) with haptens of azithromycin (AZM) and characterize its features. Methods The immunogen AZM-BSA and coating antigen AZM-OVA were synthesized by coupling AZM to the bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin (OVA) with the activated ester method. Hybridoma cell line 50D10 was obtained by fusing mouse myeloma cells Sp2/0 with splenocytes from the BALB/c mice immunized with AZM-BSA. The cell line was then injected into BALB/c mice to prepare mAb against AZM, which was detected by ELISA using this mAb. Results The titer of AZM mAb was 1:4.0×10, which belonged to IgG1 type. The sensitivity and IC of the indirect competitive ELISA was 0.287 μg/L and 1.33 μg/L, respectively. The cross-reactivity rates of the mAb with erythromycin, roxithromycin, doramectin, clarithromycin, tilmicosin and tylosin were less than 0.1%. The recovery rates of AZM added into milk ranged from 79.6% to 104.1% with the coefficients of variation between 16.4% and 27.3%. Conclusion AZM mAb with high sensitivity and specificity has been prepared, which lays a foundation for establishing a method to rapidly detect AZM.