アチャティナ・フリカ粘液は、UVB照射したヒト線維芽細胞培養物の細胞生存性を改善し、コラーゲンの沈着を増加させます

Achatina fulica mucous improves cell viability and increases collagen deposition in UVB-irradiated human fibroblast culture.

• Ch Tri Nuryana
• Sofia Mubarika Haryana
• Yohanes Widodo Wirohadidjojo
• Nur Arfian

抄録

紫外線は、マトリックスメタロプロテアーゼ-1（MMP-1）を増加させることで、皮膚の光老化を誘導します。MMP-1は真皮の結合組織を構成するI型およびIII型コラーゲンを分解するが、粘液（AFM）は線維芽細胞やコラーゲンを保護する効果を持つ自然療法である。 UVB照射したヒト線維芽細胞培養物における細胞生存率およびコラーゲン沈着に対するAFMの効果を調査するために。 5〜10ボルトの電気ショックを30〜60秒間与えて刺激した50匹のカタツムリから粘液を抽出し、凍結乾燥法により粉末化した。ヒト真皮線維芽細胞培養物を６つのグループに分け、グループ１は正常対照としてＵＶＢ照射を行わない正常線維芽細胞、グループ２〜５は１００ｍＪ／ｃｍのＵＶＢ照射を行った線維芽細胞で構成されていた。グループ２はネガティブコントロールとして無処理、グループ３はポジティブコントロール群としてPRP10％で処理し、グループ４〜６は様々な濃度のAFM（3.9；15.625及び62.5μg/mL）で処理した。実験終了時には、MTTアッセイで増殖を評価し、さらにシリウスレッドアッセイでコラーゲン沈着を測定した。リアルタイムPCR（RT-PCR）は、Coll I、Coll IIIおよびMMP-1 mRNAの発現を定量するために行われ、その後、COL 1/COL IIIの比率を測定した。 UVBは有意に生存率を低下させ、MMP-1はアップレギュレーションされ、COL IとCOL IIIのmRNA発現はダウンレギュレーションされた。一方、AFM処理群では、MMP-1のダウンレギュレーションおよびCOL IおよびCOL III mRNA発現のアップレギュレーションにより、より高い細胞生存率を示した。COL I/III発現の比率は、AFM処理群ではUVB処理群に比べて有意に（<0.05）低かった。AFM処理群の中では、62.5μg/mLのAFMの投与が最良の結果を示した。 AFMはUVB照射したヒト線維芽細胞培養物の生存率を改善する可能性があり、これはMMP-1のダウンレギュレーション、COL IとCOL IIIのアップレギュレーション、およびCOL I/III比の低下と関連していると考えられる。

Ultraviolet radiation induces skin photoaging by increasing matrix metalloproteinase-1 (MMP-1). MMP-1 degrades type I and III collagen that comprise the dermal connective tissue. mucous (AFM) is a natural remedy that has protective effects on fibroblasts and collagen. To investigate the effects of AFM on cell viability and collagen deposition in UVB-irradiated human fibroblast culture. The mucous was extracted from 50 snails that were stimulated by a 5-10 Volt electricity shock for 30-60 seconds and converted into powder by the freeze-drying process. The human dermal fibroblast culture was divided into six groups: group 1 were normal fibroblasts without UVB irradiation as normal control, groups 2-5 consisted of 100 mJ/cm UVB-irradiated fibroblasts. Group 2 had no treatment as negative control, group 3 was treated by PRP 10% as positive control group and groups 4-6 were treated by various concentrations of AFM (3.9; 15.625 and 62.5 μg/mL). At the end of the experiment, the proliferation was assessed with MTT assay, furthermore collagen deposition was measured by Sirius red assay. Real Time-PCR (RT-PCR) was performed to quantify Coll I, Coll III and MMP-1 mRNA expression, then to measured COL 1/COL III ratio. UVB induced significant lower viability, upregulated MMP-1 and downregulated COL I and COL III mRNA expressions. Meanwhile AFM treated groups demonstrated higher cell viability with downregulation of MMP-1 and upregulation of COL I and COL III mRNA expressions. The ratio of COL I/ III expression was significantly (<0.05) lower in the AFM treated groups compared to the UVB group. Among AFM treated groups, administration of 62.5 μg/mL AFM represented the best result. AFM may ameliorate viability of UVB-irradiated human fibroblast culture which associates with downregulating MMP-1, upregulating COL I and Col III, and reducing COL I/III ratio.

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