馬における間接迅速免疫組織化学検査による狂犬病ウイルス抗原の検出と他の診断技術との比較

Detection of rabies virus antigen by the indirect rapid immunohistochemistry test in equines and comparisons with other diagnostic techniques.

• Ranieli B C Torquato
• Keila Iamamoto
• Elaine R Fernandes
• Samira Achkar
• Sandriana R Silva
• Iana S S Katz
• Fernanda Guedes

抄録

馬の狂犬病の臨床診断は、この病気を他の脳炎の原因と区別するために不可欠です。直接蛍光抗体検査（dFAT）やマウスでのウイルス分離、細胞培養などの従来の手法では診断が困難であり、分子生物学的手法の応用が必要となる場合がある。我々は、馬の中枢神経系（CNS）における狂犬病ウイルス（RABV）抗原の検出を目的とした間接迅速免疫組織化学検査（iRIT）を実施し、その結果を他の診断法と比較した。我々は、2014年7月から2016年6月までにdFAT、狂犬病組織培養感染検査（RTCIT）、マウス接種検査（MIT）、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）、遺伝子配列決定を行った174頭の馬の中枢神経系のサンプルについて、ブラジル、サンパウロにあるパスツール研究所の狂犬病診断研究所の結果記録をレビューした。これらの検体のうち、29検体は技術間で乖離した結果を示し、iRITで実施するために選択された。検出された陽性率は、dFATで4/29（14％）、RTCITで5/28（18％）、MITで10/29（35％）、RT-PCRで26/27（96％）であった。大脳皮質、海馬、小脳、脳幹を10%緩衝ホルムアルデヒドで固定したスライドのインプリントを介して29のサンプルを分析した。そのうち18サンプルがiRITアッセイで陽性（62％）と同定され、dFAT、MIT、RTCITでは検出されたがRT-PCRでは検出されなかったサンプルよりも陽性例の数が多くなりました。脳領域の中では、脳幹が最も高い陽性率（78%）を示し、次いで海馬（69%）、小脳（67%）、大脳皮質（67%）となりました。この結果は、iRITが馬の狂犬病の迅速な診断に貢献できること、また、この種の狂犬病の診断精度を向上させるために補完的な検査を使用すべきであることを示す証拠となりました。

Laboratory diagnosis of rabies in equines is essential for distinguishing the disease from other sources of encephalitis. Diagnosis by conventional techniques such as a direct fluorescent antibody test (dFAT) or viral isolation in mice or cell culture can be difficult, and the application of molecular biological methods may be necessary. We performed an indirect rapid immunohistochemistry test (iRIT) for the detection of the rabies virus (RABV) antigen in the central nervous system (CNS) of equines and compared the results with those of other diagnostic techniques. We reviewed result records from the Rabies Diagnosis Laboratory at Instituto Pasteur, São Paulo, Brazil, of 174 samples of equine CNS from July 2014 to June 2016, which were investigated by dFAT, rabies tissue culture infection test (RTCIT), mouse inoculation test (MIT) and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) followed by genetic sequencing. These samples, 29 presented divergent results among techniques and were selected for the performed in the iRIT. The detected positivity rate was 4/29 (14%) by dFAT, 5/28 (18%) by RTCIT, 10/29 (35%) by MIT and 26/27 (96%) by RT-PCR. We analysed 29 samples through imprints of the cortex, hippocampus, cerebellum and brainstem in slides fixed in 10% buffered formaldehyde. Eighteen samples were identified as positive (62%) by iRIT assay, representing a greater number of positive cases than that detected by dFAT, MIT and RTCIT but not by RT-PCR. Among the brain regions, the brainstem presented the highest positivity (78%), followed by the hippocampus (69%), cerebellum (67%) and cortex (67%). Our results provide evidence that iRIT can contribute to a rapid diagnosis of rabies in equines and that complementary tests should be used to improve diagnostic accuracy in this species.

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